小恒学术问答
» Heng
最后活动于2015-04-09
回复了主题 › 包装慢病毒若使用pSPAX2和pMD2G系统，一般比例用多少？我实验做了几次效果都不好
1 μg pLKO.1 shRNA plasmid，750 ng psPAX2 packaging plasmid ，250 ng envelope plasmid pMD2G
« 2015-04-09
回复了主题 › 在一些启动子质粒中，启动子后面有TA序列，是什么作用?
TATA框可以作为一个弱启动子，ISRE-TA-LUC中ISRE是类似增强子的一个原件。如果没有TA就得克隆ISRE的全部启动子了，也就是说这里的ISRE不是启动子，是增强子。如果你要克隆全部的启动子就不需要TA
« 2015-04-08
创建了主题 › 问下一个慢病毒带hygromycin抗性，一个带Blast抗性，想过表达着两个病毒的目的蛋白，该如何操作？
问下一个慢病毒带hygromycin抗性，一个带Blast抗性，想过表达着两个病毒的目的蛋白，该如何操作？
« 2015-04-07
回复了主题 › 请问病毒冰上解冻能用4度解冻替代吗？
都可以的，一般情况下病毒滴度还是满足需要的,即使损失一些影响也不会很大,最好还是在冰上溶解
« 2015-04-02
回复了主题 › 求助：慢病毒转染后，多少小时可以把细胞消化到培养瓶里面进行培养？
重新传一下再感染，不用等
« 2015-04-01
创建了主题 › 求助：慢病毒转染后，多少小时可以把细胞消化到培养瓶里面进行培养？
求助：慢病毒转染后，多少小时可以把细胞消化到培养瓶里面进行培养？
« 2015-04-01
回复了主题 › 腺病毒打动物，对它的纯化要求高吗？
打动物的话最好用氯化铯纯化,先做细胞再做动物。做细胞可以用上清，但动物必须浓缩。一般滴度1x10^11左右,不是说一定要11次方什么的，是说动物实验一定要纯化的，如果是纯化后的10次方也可以
« 2015-03-31
回复了主题 › 在慢病毒包装中，磷酸钙转染的时候培养液里面有抗生素对转染效率影响大么？
转染时一定要用含血清的培养基，否则细胞会很快就会死掉的，但不要加抗生素。不加抗生素的原因是抗生素会对细胞造成生长压力导致转染效率低下，如果你想加的话，在转染前去掉有抗生素血清，转染过程换成无抗生素有血清环境，等到6小时或是12小时换液的时候换成带抗生素的完全培养基就可以了。这时候认为细胞已经转染完毕。
« 2015-03-26
回复了主题 › 含有目的基因的慢病毒（包毒浓缩后，含有GFP）感染目的细胞，是不是3-4天之后才能看到表达（GFP）？
这得视你的病毒滴度和基因表达情况。一般一两天就有荧光。 但，一般三天才能完全表达
« 2015-03-20
创建了主题 › 含有目的基因的慢病毒（包毒浓缩后，含有GFP）感染目的细胞，是不是3-4天之后才能看到表达（GFP）？
含有目的基因的慢病毒（包毒浓缩后，含有GFP）感染目的细胞，是不是3-4天之后才能看到表达（GFP）？
« 2015-03-20
创建了主题 › 磷酸钙转染293FT，收毒的时间一般是多少个小时之后啊？
磷酸钙转染293FT，收毒的时间一般是多少个小时之后啊？
« 2015-03-20
回复了主题 › 请教一下，慢病毒或腺病毒做活体实验要怎做, 体外培养了稳定细胞注入体内还是直接病毒注入动物？
都可以，看你的实验要求, 如果是病毒感染细胞，不一定需要稳定细胞株，若为稳定株，则需要使用慢病毒，好处是，体内实验比较久的，比如裸鼠成瘤，一般体内需要1个月的时间才取材，那就必须使用慢病毒-稳定株，若只是细胞标记，然后注射几天后看分化或迁移情况，一般瞬转病毒（AD or LV)即可, 这种情况下，研究的是，某种细胞在体内的状态（例如：过表达XXX基因的干细胞移植到耳蜗内，观察是否可以分化成毛细胞，或者缺少某基因的某肿瘤细胞系在裸鼠内成瘤能力是否降低）,如果是病毒直接注射体内，一般研究的是，体内某些细胞调控某些基因后，产生的在体的表型的变化（行为学，病理学，电生理等）,例如：将肝脏已经原位成瘤的
« 2015-03-18
创建了主题 › 一般病毒在正常人体内应该可以发生二次感染吧，那实验室在包装病毒时候会有安全隐患吧？！
一般病毒在正常人体内应该可以发生二次感染吧，那实验室在包装病毒时候会有安全隐患吧？！
« 2015-03-18
创建了主题 › 请教一下，慢病毒或腺病毒做活体实验要怎做, 体外培养了稳定细胞注入体内还是直接病毒注入动物？
请教一下，慢病毒或腺病毒做活体实验要怎做, 体外培养了稳定细胞注入体内还是直接病毒注入动物？
« 2015-03-18
创建了主题 › 腺病毒和质粒能同时转进细胞里吗？
腺病毒和质粒能同时转进细胞里吗？
« 2015-03-17
创建了主题 › 请问腺相关病毒载体AAV2/1~2/9有什么区别？
请问腺相关病毒载体AAV2/1~2/9有什么区别？
« 2015-03-13
回复了主题 › 有人做过心肌细胞的病毒转染吗，用的什么细胞?
心肌细胞系： H9C2，HL1，neonatal，其中常用的：neonatal用腺病毒，H9C2用慢病毒, 不过，不是根据病毒决定细胞，是根据你的model决定细胞，再根据具体的情况选择病毒工具
« 2015-03-12
回复了主题 › 想问一下，现在都是怎么检测慢病毒包装的滴度的，听说现在都在用流式是吗?
载体有荧光则可以稀释法检测，流式检测感染效率
« 2015-03-06
回复了主题 › 请问下含有重组质粒的菌液在划板挑单克隆摇菌等过程中，重组质粒的外源片段可能突变吗？
在分子克隆、质粒构建过程中，有一堆无法理论解释的现象，所以还得最后的测序结果说了算
« 2015-02-07
创建了主题 › 腺病毒和慢病毒感染靶原代细胞是不是很难感染，一般MOI得多少？
腺病毒和慢病毒感染靶原代细胞是不是很难感染，一般MOI得多少？
« 2015-02-07
创建了主题 › 请问转染过质粒的细胞培养两天后全飘起来了，这是什么情况啊?
请问转染过质粒的细胞培养两天后全飘起来了，这是什么情况啊?
« 2015-02-06
创建了主题 › 细胞转染是不是不能在玻片上进行？
细胞转染是不是不能在玻片上进行？
« 2015-02-06
回复了主题 › 组启动子特异性的慢病毒可以在体内稳定表达多久啊？有人知道否？
组织特异性，说明是时空特异性的，要何时表达，何时收敛，取决于机体自身的调控
« 2015-01-27
回复了主题 › 实验结果相反，求大神分析。
siRNA转染时转染试剂毒性造成细胞生长抑制，以lenti-virus为准， siRNA结果建议和control siRNA 比较，不要和Lenti-virus比较
« 2015-01-26
回复了主题 › 慢包病毒相关问题
没出毒,蛋白表达48-72小时, 到72小时还是没有的话就从细胞状态和转染效率上找问题、
« 2015-01-23
创建了主题 › 为什么慢病毒包装时 除了表达质粒外 还有包装质粒 一起转染 包装细胞呢？包装质粒的作用是什么呢？
为什么慢病毒包装时 除了表达质粒外 还有包装质粒 一起转染 包装细胞呢？包装质粒的作用是什么呢？
« 2015-01-23
创建了主题 › 如果同样用病毒的话腺病毒是不是比慢病毒毒性小些？O(∩_∩)O谢谢
如果同样用病毒的话腺病毒是不是比慢病毒毒性小些？O(∩_∩)O谢谢
« 2015-01-19
创建了主题 › 亲们，检测蛋白的泛素化是不是转膜的时间得长点？
亲们，检测蛋白的泛素化是不是转膜的时间得长点？
« 2015-01-19
创建了主题 › 有没有做过双荧光素酶报告实验的？
有没有做过双荧光素酶报告实验的？
« 2015-01-16
回复了主题 › 如果通过荧光观察病毒感染的细胞，是可以扩增，但是感染目的细胞没有荧光，这是为什么？求牛人指点！
滴度低，MOI不合适，或者腺病毒类型感染不上目的细胞
« 2015-01-15
