小恒学术问答
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最后活动于2016-01-06
创建了主题 › 摸索病毒的MOI值是用对照病毒还是用阳性病毒摸索？
摸索病毒的MOI值是用对照病毒还是用阳性病毒摸索？
« 2016-01-06
创建了主题 › 293包装出的慢病毒怎么检测滴度？跪求指导
293包装出的慢病毒怎么检测滴度？跪求指导
« 2016-01-04
创建了主题 › 慢病毒测自噬流
慢病毒测自噬流
« 2016-01-04
创建了主题 › 基因片段2kb，连接都腺病毒载体，感染动物，效率是不是很低？
基因片段2kb，连接都腺病毒载体，感染动物，效率是不是很低？
« 2015-12-29
创建了主题 › 荷瘤实验，注射稳转细胞株，还是成瘤后局部注射慢病毒好一些？谢谢
荷瘤实验，注射稳转细胞株，还是成瘤后局部注射慢病毒好一些？谢谢
« 2015-12-29
创建了主题 › 慢病毒转染治疗最多能带多长的外源基因？谢谢
慢病毒转染治疗最多能带多长的外源基因？谢谢
« 2015-12-28
创建了主题 › 腺病毒载体构建
腺病毒载体构建
« 2015-12-25
创建了主题 › 想把目的是基因过表达之后用腺病毒转染心肌组织
想把目的是基因过表达之后用腺病毒转染心肌组织
« 2015-12-24
创建了主题 › pacI酶切腺病毒
pacI酶切腺病毒
« 2015-12-23
回复了主题 › 如果往小鼠体内注射AAV敲除掉某个基因效果好吗？
用AAV-cas9。crispr/cas9最早在细菌中被发现，CRISPR-Cas9系统能够切割DNA，充当了对抗病毒感染的一个重要防御机制。尽管许多的微生物物种都拥有这一系统，研究人员优先选择改造了来自化脓链球菌的Cas9酶(SpCas9)来改变高等生物的DNA，并已成为一系列高度通用的基因组修饰技术的基础。要想扰乱成体动物中的基因，必须要利用一些载体将CRISPR-Cas9系统的关键元件导入到细胞中。由于不会引起人类疾病并已在欧洲获得临床监管机构的批准，腺相关病毒(AAV)被视为是最有前景的候选载体之一。
« 2015-12-21
回复了主题 › 尾静脉注射的慢病毒，它会在哪里表达或干扰比较多啊？
相对而言，肝脏会多一点，应该说哪里表达都不是很多，肝脏会更多,其他组织很少。可以原位注射
« 2015-12-21
回复了主题 › 腺病毒转染RAW264.7细胞感染效率大约有多少？文章里高的转染效率是筛选后的吗？谢谢~
腺病毒感染一般不做抗性筛选，感染效率80%以上
« 2015-12-17
创建了主题 › 腺病毒和慢病毒用0.22um滤头过滤损耗大吗？病毒会不会吸附在滤膜上呢？
腺病毒和慢病毒用0.22um滤头过滤损耗大吗？病毒会不会吸附在滤膜上呢？
« 2015-12-17
回复了主题 › 用慢病毒感染细胞需要polybrene吗？
加助转剂感染效果会好一些，但同时polybrene也会有一定毒性，因此需要换液，一般最长时间是过夜就换
« 2015-12-15
回复了主题 › 慢病毒感染之后，长期做实验，GFP荧光效率会不会越来越低？为什么？
会的，因为存在非阳性的细胞，随着扩增代数增加就会越变越多，所以过一段时间后sorting, 对于原代细胞sorting是会更合适一点.也可以在用抗生素筛选
« 2015-12-11
创建了主题 › 腺病毒感染后的细胞封片前，需要DAPI染核吗？
腺病毒感染后的细胞封片前，需要DAPI染核吗？
« 2015-12-11
创建了主题 › 用腺病毒做过表达，是否不同的基因共用一个对照就可以了呢？
用腺病毒做过表达，是否不同的基因共用一个对照就可以了呢？
« 2015-12-09
创建了主题 › 如果为了提高效应，能不能在感染的过程中加倍慢病毒用量，比如加大5-10倍，可以吗？谢谢啦！
如果为了提高效应，能不能在感染的过程中加倍慢病毒用量，比如加大5-10倍，可以吗？谢谢啦！
« 2015-12-09
创建了主题 › 如何计算慢病毒用量
如何计算慢病毒用量
« 2015-12-08
回复了主题 › 慢病毒稳转筛选以后培养需要一直加嘌呤霉素维持么？谢谢
时间长了维持一下就可以，不用一直维持，如果后期检测发现效果没有了，可以低浓度维持
« 2015-12-07
创建了主题 › 构建miRNA的病毒载体，用哪种病毒比较合适呢？
构建miRNA的病毒载体，用哪种病毒比较合适呢？
« 2015-12-07
回复了主题 › 脂肪细胞用AAV哪个血清型感染效率会比较高？
9型，9型腺相关病毒(adeno-associated virus serotype9,AAV9)安全性好，免疫原性低，可携带外源基因在体内长期表达
« 2015-12-02
创建了主题 › AAV 转染干细胞
AAV 转染干细胞
« 2015-12-02
回复了主题 › 293T转染得到的上清（病毒液） 要是用于体外转染的话，是不是可以不纯化浓缩直接感染目的细胞？谢谢！
慢病毒原液可以直接用于细胞感染，不需要纯化
« 2015-12-01
创建了主题 › 腺病毒的纯化方式
腺病毒的纯化方式
« 2015-12-01
回复了主题 › 慢病毒载体感染肿瘤细胞建系后做裸鼠成瘤，但基因片段很长怎么办？
首先，插入片段在5kb的慢病毒基本包不出来（因为还要启动子，各种其他元件，筛选元件等），即使包出来慢病毒滴度也很低，用慢病毒建稳转系成功率很低。如果一定要建稳转系，可考虑质粒载体直接电转进行稳筛，不过周期需要大概3-6个月。另外，针对这个问题，我不认为非得稳转细胞株才能做后续的裸鼠成瘤实验。5kb包慢病毒难，包腺病毒还是可以实现的。那么腺病毒可以做裸鼠成瘤吗？其实完全可以，只是腺病毒与肿瘤裸鼠成瘤实验的作用方式，与慢病毒截然不同。慢病毒是先做成稳转株，然后皮下成瘤（当然还有其他成瘤），进一步观察瘤子的发展；腺病毒则是先用野生的肿瘤细胞系成瘤，在瘤子长出可见后（约3周），行瘤内腺病毒注射，以观察
« 2015-11-25
回复了主题 › 想问一下，用293T可以包腺病毒吗?
腺病毒要用293A,293T用来包装慢病毒
« 2015-11-23
回复了主题 › 请问一下，慢病毒感染原代细胞，滴度最少要多少？谢谢
MOI在100以上,
« 2015-11-20
回复了主题 › 目的基因融合GFP的腺病毒扩增 收毒相关问题
变圆就可以收了，要不然等到细胞死了病毒就到上清里了
« 2015-11-17
创建了主题 › iPS，准备感染细胞，病毒用量的问题
iPS，准备感染细胞，病毒用量的问题
« 2015-11-17
