小恒学术问答
» Heng
最后活动于2015-07-09
回复了主题 › 腺病毒 动物实验
腺病毒在体3weeks，快速成长期的动物，随着肝脏生长，病毒稀释是肯定的,六周以上的小鼠都算成年，不过八周做实验是最稳定的
« 2015-07-09
创建了主题 › 腺病毒 动物实验
腺病毒 动物实验
« 2015-07-09
回复了主题 › 大神们，想要收集1L以上的的病毒液，直接超速的话样品太多，该怎么收集呢？
PEG沉淀下就好了
« 2015-07-07
回复了主题 › 慢病毒可以用什么溶解呢？
DMEM，pbs，都可以
« 2015-07-07
回复了主题 › 用慢病毒感染了细胞之后，有细胞死亡的现象吗
有可能是病毒引起的，还是polybrene引起的，先去掉polybrene试试，而且你的polybrene量太大了，我们一般是2ug
« 2015-07-06
创建了主题 › H9c2细胞中用lipo2000转染siRNA
H9c2细胞中用lipo2000转染siRNA
« 2015-06-26
回复了主题 › 神经元细胞的感染效率如何？
可以使用AAV，这个尤其是神经系统里面应用广泛，而且免疫原性低，适合动物实验
« 2015-06-17
创建了主题 › 包装慢病毒时，转染方法用磷酸钙法效果怎样？磷酸钙怎么配？
包装慢病毒时，转染方法用磷酸钙法效果怎样？磷酸钙怎么配？
« 2015-06-16
创建了主题 › 请问浓缩的病毒感染细胞效果不好有哪些原因？
请问浓缩的病毒感染细胞效果不好有哪些原因？
« 2015-06-15
回复了主题 › 包装好的慢病毒感染原代细胞时，加polybrene，有没有先后顺序?
“多聚阳离子Polybrene”可通过中和细胞与病毒颗粒间的静电排斥而促进其帖附，进一步提高病毒感染效率。一起加, Polybrene可以配在培养基里面,
« 2015-06-11
回复了主题 › EF1alpha-cPPT-目的基因（500bp）-IRES-LUC-GFP-这样的慢病毒骨架设计可以吗？
不太好, 换T2a,用这个质粒的话你把t2a和luc加在后面就行，但是还加目的基因再加一个启动子的话，质粒也太大了，病毒滴度会起不来的,这个是目的基因和GFP的融合蛋白了,EF1alpha-cPPT-目的基因（500bp）-T2A-LUC这样比较好
« 2015-06-05
创建了主题 › EF1alpha-cPPT-目的基因（500bp）-IRES-LUC-GFP-这样的慢病毒骨架设计可以吗？
EF1alpha-cPPT-目的基因（500bp）-IRES-LUC-GFP-这样的慢病毒骨架设计可以吗？
« 2015-06-05
创建了主题 › Kozak序列对真核表达影响大吗， 有没有人对比过？
Kozak序列对真核表达影响大吗， 有没有人对比过？
« 2015-06-04
创建了主题 › 做转染包装慢病毒是24,48收样好呢还是48,72收样好呢?
做转染包装慢病毒是24,48收样好呢还是48,72收样好呢?
« 2015-06-02
回复了主题 › western检测蛋白磷酸化，怎么收蛋白比较靠谱?
细胞处理完，立即置于冰上，弃液，冰浴PBS 洗两遍，加入裂解液（含磷酸化酶抑制剂和PMSF）关键是低温
« 2015-05-26
创建了主题 › 鉴定一个蛋白是否为核蛋白。病毒介导转染过表达载体，egfp报告基因，就能看到核内的绿色融合蛋白吗？
鉴定一个蛋白是否为核蛋白。病毒介导转染过表达载体，egfp报告基因，就能看到核内的绿色融合蛋白吗？
« 2015-05-26
创建了主题 › western检测蛋白磷酸化，怎么收蛋白比较靠谱?
western检测蛋白磷酸化，怎么收蛋白比较靠谱?
« 2015-05-26
回复了主题 › 请教各位做过的lncRNA克隆到慢病毒载体中,需要在序列末端带上poly A序列吗?
lncRNA 用慢病毒风险很大，慢病毒是RNA病毒，lncRNA的转录终止需要polyA，而polyA会导致慢病毒包装过程中，慢病毒基因组的表达提前终止，导致慢病毒包毒不成功。lncRNA很多的polyA需要外加，因为自身不一定带。还有一点，有些LncRNA会发生自切割，因此在包装的时候，转录出来的慢病毒基因组也可能因为lncRNA的自切割而发生断裂，导致包毒失败。还有就是有些公司不会在载体上加入lncRNA转录终止所需的polyA，这样的lncRNA能用慢病毒进行包装，且包出来的lncRNA可以用QPCR检测得到，但是这样表达出来的lncRNA比原始的lnc长度可能更长，功能也可能发生变化。
« 2015-05-22
创建了主题 › 请教各位做过的lncRNA克隆到慢病毒载体中,需要在序列末端带上poly A序列吗?
请教各位做过的lncRNA克隆到慢病毒载体中,需要在序列末端带上poly A序列吗?
« 2015-05-22
回复了主题 › 用慢病毒做过表达，是将目的基因全部序列构建表达载体还是只将引物构建表达载体？
将你基因的cds区域克隆到载体上就可以了，CDS=编码区序列coding sequence，在核酸序列中能够翻译成蛋白质氨基酸序列的部分
« 2015-05-20
创建了主题 › 问病毒的大神们 有办法用病毒的办法做条件cre敲除么？
问病毒的大神们 有办法用病毒的办法做条件cre敲除么？
« 2015-05-19
创建了主题 › 慢病毒载体和普通的载体，如果启动子是一样的，他们在普通转染后的过表达效果有差么？就纯粹的转染呢？
慢病毒载体和普通的载体，如果启动子是一样的，他们在普通转染后的过表达效果有差么？就纯粹的转染呢？
« 2015-05-19
创建了主题 › 哪位大神帮我分析一下我的wb结果还需要怎么改进，问题出在哪里?
哪位大神帮我分析一下我的wb结果还需要怎么改进，问题出在哪里?
« 2015-05-15
创建了主题 › 内参α-Tublin 怎么会有两条带啊?
内参α-Tublin 怎么会有两条带啊?
« 2015-05-15
回复了主题 › shRNA测序问题
让他再测一次，还是不对，就重复一次实验，多测几个测到对的为止，实验经常有些这样的问题，不需要纠结，你的目的是得到正确的结构，有精力就想想错误的是怎么回事，没有精力就不要纠结这些，没有太大意义.
« 2015-05-07
创建了主题 › shRNA测序问题
shRNA测序问题
« 2015-05-07
创建了主题 › 病毒样颗粒是在4度解冻好，常温解冻, 还是37解冻好啊 ?
病毒样颗粒是在4度解冻好，常温解冻, 还是37解冻好啊 ?
« 2015-05-07
回复了主题 › 有没有细胞刺激后某个蛋白表达水平上调，但是启动子却没有激活的现象?
蛋白表达升高，不一定要来自转录, 表达多了，mRNA降解少了，mRNA运输调控了，翻译效率提升了，蛋白降解少了
« 2015-05-06
创建了主题 › 哪位小伙伴知道DLD1细胞的慢病毒的MOI吗？
哪位小伙伴知道DLD1细胞的慢病毒的MOI吗？
« 2015-05-05
创建了主题 › 慢病毒包装出来感染细胞就死，年前包的还可以, 年后包出来感染细胞就死,为何啊？
慢病毒包装出来感染细胞就死，年前包的还可以, 年后包出来感染细胞就死,为何啊？
« 2015-04-28
