小恒学术问答
» Heng
最后活动于2015-11-16
创建了主题 › 特效抗支原体试剂-SaveIt具体怎么用呀，就是作用时间之类的? 谢谢
特效抗支原体试剂-SaveIt具体怎么用呀，就是作用时间之类的? 谢谢
« 2015-11-16
回复了主题 › 公司做的慢病毒回来了，怎么摸索最佳的感染浓度？谢谢
一般用慢病毒进行感染预实验，需要设置一系列的MOI梯度，比如可设置MOI 10--100，1倍梯度就可以了。MOI摸索的时候在96孔板内进行就可以了，这样也可以省些病毒。细胞以合适的数目接种到96孔板内，根据你预设的MOI值及病毒的滴度值，计算出每孔需要加入的病毒量（可梯度稀释）。感染的时候大部分细胞需要加入polybrene以增强感染，你可以先网上查下你要做的细胞系感染时能否加入polybrene。
« 2015-11-11
回复了主题 › 慢病毒感染细胞，仅仅这个过程，凭经验说，该注意什么？
慢病毒感染目的细胞，需要在生物安全柜内进行操作，若实验室只有超净工作台的话，则进行病毒操作的时候需要关掉风机。另外，操作完毕后所有与病毒接触的枪头、EP管等废弃物需要84消毒液浸泡处理。
« 2015-11-11
回复了主题 › 质粒转染和病毒载体介导转染的区别?各自优缺点？
一、质粒转染：相对简单的基因传递方式，与三种病毒载体主动进行细胞攻击侵染方式不同，质粒转染属于被动扩散。质粒转染的优点：质粒载体的构建流程相对简单，速度快（病毒载体都需要先构建载体后包装成病毒颗粒）。质粒转染的缺点也十分明显：1）在细胞水平，质粒转染效率不稳定，不同细胞依照不同的转染方法和转染介质，效率差 别较大，且大部分方法效率不高；2）质粒转染一般入核效率低，特别是阳离子脂质体，阳离子聚合物等介质，电转质粒入核 的效率则比介质转高不少，但比起慢病毒转染，效率仍然低很多，且对细胞损伤较大。 二、病毒载体转染：病毒载体相对于质粒，优
« 2015-11-09
创建了主题 › 质粒转染和病毒载体介导转染的区别?各自优缺点？
质粒转染和病毒载体介导转染的区别?各自优缺点？
« 2015-11-09
创建了主题 › 现在有一个慢病毒构建的表达质粒，在之后的质粒扩增，提取，转染细胞，哪步实验操作需要注意安全？谢谢
现在有一个慢病毒构建的表达质粒，在之后的质粒扩增，提取，转染细胞，哪步实验操作需要注意安全？谢谢
« 2015-10-28
创建了主题 › 通过瞬转，质粒无法进入细胞，求大神分析
通过瞬转，质粒无法进入细胞，求大神分析
« 2015-10-15
回复了主题 › 包装好的腺病毒怎么寄？直接用冰袋还是干冰？
用普通的冰袋，不可以用干冰运输，因为干冰所造成的CO2气体环境会大大降低缓冲液的pH值，从而极大影响腺病毒在缓冲液中的稳定性。但如果使用封口严密的西林瓶或安培瓶包装腺病毒，则可以用干冰运输。
« 2015-10-11
创建了主题 › 包装好的腺病毒怎么寄？直接用冰袋还是干冰？
包装好的腺病毒怎么寄？直接用冰袋还是干冰？
« 2015-10-11
创建了主题 › 慢病毒感染细胞中 Polybrene具体作用是什么？
慢病毒感染细胞中 Polybrene具体作用是什么？
« 2015-10-11
创建了主题 › 质粒浓度0.65ug/ul, 可以用来转染吗？
质粒浓度0.65ug/ul, 可以用来转染吗？
« 2015-09-28
回复了主题 › 转染了慢病毒后带有eGFP的细胞进行MTT检测对结果有影响吗？
这需要看GFP的波长，若和MTT有重叠，则会有影响，
« 2015-09-18
回复了主题 › 慢病毒感染 荧光率问题
每种细胞能够被病毒感染的情况不一样的，有容易感染的，也有不易的，荧光强度跟融合GFP有关系的，所以跟MOI的关系不大
« 2015-09-17
创建了主题 › 有没有用重组腺病毒做动物试验, 一般病毒滴度到多少合适？用量多少呢？谢谢
有没有用重组腺病毒做动物试验, 一般病毒滴度到多少合适？用量多少呢？谢谢
« 2015-09-17
回复了主题 › 慢病毒感染目的基因整合
慢病毒在靶细胞中表达分为整合表达及非整合表达，一般而言对于携带抗性基因的载体而言（无论是质粒载体还是慢病毒载体），蛋白表达后药物筛选时间一般为2~3周时间，此时获得的细胞群基本上认为是整合表达的，也就是所谓的稳定表达。从这个意义上来说，通过你说的将感染的细胞培养3~4周后，再进行流式分选理论上是可以很大程度减少非整合表达细胞的比例。因为稳定株后续培养中仍有可能将整合的基因发生丢失，即使比例比较低，但这少部分发生丢失的细胞以及分选中可能残留的少部分未感染的细胞会因为生长优势而使得其比例越来越高，又因为你的载体是不具备抗性基因的，所以后续如果观察荧光比例明显降低的话，只能再次通过流式进行分选了。
« 2015-09-16
创建了主题 › 慢病毒感染肿瘤细胞 载体没有抗性 怎么筛选
慢病毒感染肿瘤细胞 载体没有抗性 怎么筛选
« 2015-09-16
回复了主题 › #慢病毒包装# 病毒包装完成后如何收集病毒液？需要用滤器过滤吗？
直接收集至15ml离心管，然后高速离心（>3000rpm)离心5min。轻轻吸取上清，剩余1ml不要用
« 2015-09-10
创建了主题 › 慢病毒感染细胞
慢病毒感染细胞
« 2015-09-10
创建了主题 › 切片方法验证慢病毒是否感染成功
切片方法验证慢病毒是否感染成功
« 2015-09-05
回复了主题 › 腺病毒 ELISA
因为DC和淋巴细胞都是小鼠的，所以试剂盒买小鼠的，检测分泌的最好是上清
« 2015-08-27
回复了主题 › 请教一下，我的细胞慢病毒感染以后，加puro 死的不多，但是现在细胞长满了，然后该怎么办呢?
先传代，待细胞贴壁后，可以加大药筛浓度，继续筛
« 2015-08-17
回复了主题 › 请教，慢病毒感染细胞96h了 一点荧光都没有， 用了 2ug/ml嘌呤霉素筛选, 有死的,但是不多，接下来怎么办？
细胞收一部分，和转空病毒的对照一起，western或者做个qpcr看看敲低效果，若有，就可以啦，没有的话重新感染，或者加大筛选浓度，
« 2015-08-14
回复了主题 › 包装慢病毒，感染悬浮细胞，载体是带荧光好，还是抗性好，还是两个都带呢？
如果只能选一个那就带荧光，可以方便看转染效果, 载体片段大小允许下，可以两个都带的
« 2015-08-07
回复了主题 › 新手请教，慢病毒感染细胞36h ，为什么还没看见荧光表达呢 ，这个正常吗?
正常，再等等,这个感染的时间和你的细胞、 moi 、蛋白大小都有关系, 72-96h左右看看, 要测滴度的，细胞表达不能太过, 如果病毒moi过高，细胞会自溶，不过你这现在还没有荧光，估计问题不大
« 2015-08-07
回复了主题 › 请教大神，包装病毒，转染12小时以后空载体骨架的荧光很强，但是目的没有荧光，咋办啊?
因为片段插入使荧光表达减弱，这是正常的现象，等到24h再看看，如果还没有可以48h继续观察，同时荧光强弱与你的感染效率不成正比，所以说要想检测是否有效，还是得通过western，real-time或者等技术手段证明
« 2015-08-05
创建了主题 › 包装病毒除了293T还能用其他的细胞吗？
包装病毒除了293T还能用其他的细胞吗？
« 2015-08-04
创建了主题 › 构建好的腺病毒，一直都感染不上我的悬浮细胞，还请大家帮忙分析一下？
构建好的腺病毒，一直都感染不上我的悬浮细胞，还请大家帮忙分析一下？
« 2015-07-31
创建了主题 › 对于cre小鼠，注射腺病毒，能不能特异性表达 A基因+GFP,，不是做敲除，是要求过表达，可以达到吗？
对于cre小鼠，注射腺病毒，能不能特异性表达 A基因+GFP,，不是做敲除，是要求过表达，可以达到吗？
« 2015-07-21
创建了主题 › 慢病毒做RAW264.7构建稳转细胞株
慢病毒做RAW264.7构建稳转细胞株
« 2015-07-16
创建了主题 › 有哪位大神知道病毒感染细胞后，哪怕换液了细胞一直有碎片，是什么原因吗？
有哪位大神知道病毒感染细胞后，哪怕换液了细胞一直有碎片，是什么原因吗？
« 2015-07-13
