小恒学术问答
» Heng
最后活动于2020-05-19
创建了主题 › 细胞感染
细胞感染
« 2020-05-19
创建了主题 › 细胞转染
细胞转染
« 2020-05-19
创建了主题 › 启动子
启动子
« 2020-05-19
回复了主题 › 大数尾静脉注射病毒之后，用量太多导致大鼠充血性休克，这种对实验有影响吗
病毒的注射体积不要太大，一般300ul左右吧
« 2020-04-30
回复了主题 › lipo2000做转染，细胞状态不好，求大神指点迷津~
很大可能是你原来细胞状态就不好，还有就是你转染的质粒量是多少？因为你细胞量本来就少，如果转染的质粒量多，会影响到细胞状态。建议你重新做一次。另外，你也没说转染的细胞类型，有些细胞不适合脂质体转染的方法，效率不高。建议你把情况说的清楚一点，大家才能根据经验给你一些建议。
« 2020-04-30
创建了主题 › 病毒复制
病毒复制
« 2020-04-30
创建了主题 › miRNA过表达和干扰研究方法
miRNA过表达和干扰研究方法
« 2020-04-30
创建了主题 › 自噬病毒，细胞核内非常亮，细胞质的自噬小点很少，可能是什么原因呀？
自噬病毒，细胞核内非常亮，细胞质的自噬小点很少，可能是什么原因呀？
« 2020-04-30
创建了主题 › 自己包的病毒感染细胞后能看见过表达，但是蛋白表达程度总是不够？怎么优化
自己包的病毒感染细胞后能看见过表达，但是蛋白表达程度总是不够？怎么优化
« 2019-11-15
回复了主题 › 用293T细胞扩病毒如何提高病毒的滴度呢？
腺病毒吧？要想扩增得到高滴度的腺病毒，要注意：1. 优质的293细胞；2. 感染不足或者过量都会导致扩增得到的腺病毒滴度低；3. 种子病毒滴度不能太低，扩增前检测下种子病毒的滴度是否合适；
« 2019-11-04
回复了主题 › 用293T细胞扩病毒如何提高病毒的滴度呢？
跟293质量有关，细胞状态不好严重影响滴度。试试293A细胞，可以问专业的病毒公司购买293a或者293HEK细胞试试，市场上不容易买到质量好的293a细胞。汉恒生物做这一块比较多，可以问问看有没有质量比较好的293细胞出售。
« 2019-10-18
回复了主题 › 病毒几个结构蛋白的质粒转染细胞，收集细胞上清进行蔗糖密度梯度离心，得到病毒样颗粒用于WB实验。我需要转染多少细胞才能达到我WB的实验需求？
WB实验最低可以1*10的5次方细胞，病毒原液一般滴度是1*10的6次方到1*10的7次方，具体你推算下。
« 2019-10-18
回复了主题 › 请问不同血清型AAV病毒包装时的区别是什么？
跟AAV-RC质粒类型有关，是AAV文库体内实验筛选出来的
« 2019-10-18
创建了主题 › 跪求各位大神指点，看文献一般要求MOI=5或10，如果是这样加1ul病毒原液（TCID50=10-7.876/0.1ml）至6孔板就能达到这个要求，但是师姐们都采用加200 TCID50浓度1ml病毒液进行试验，但是如果按这个计算病毒液的话，和MOI算出来差了一个103个数量级，急求各位大师指点，我是哪里弄错了
跪求各位大神指点，看文献一般要求MOI=5或10，如果是这样加1ul病毒原液（TCID50=10-7.876/0.1ml）至6孔板就能达到这个要求，但是师姐们都采用加200 TCID50浓度1ml病毒液进行试验，但是如果按这个计算病毒液的话，和MOI算出来差了一个103个数量级，急求各位大师指点，我是哪里弄错了
« 2019-10-07
创建了主题 › 悬浮细胞感染
悬浮细胞感染
« 2017-02-27
回复了主题 › 慢病毒感染
加全体积相当于降低了病毒浓度，肯定是有影响的。如果你细胞比较容易感染那就无所谓了，还是按照规范来操作比较好，如果不放心，多感染一些时间，也可以复感染的
« 2017-02-21
创建了主题 › 慢病毒感染
慢病毒感染
« 2017-02-21
创建了主题 › 腺病毒大鼠尾静脉注射，如何确定注射量？
腺病毒大鼠尾静脉注射，如何确定注射量？
« 2017-02-13
回复了主题 › 原代细胞过表达，选慢病毒还是腺病毒好呢？
看你是否需要构建稳转株。慢病毒稳转，腺病毒瞬转。同时跟你基因的大小也有些关系
« 2017-02-07
回复了主题 › 慢病毒转染两天后用荧光显微镜看完全没有荧光染色 是病毒失效了吗？
有时候荧光蛋白表达比较晚,另外血清加了影响不太大，不过病毒经过反复冻融的话滴度会降低很多，可能是病毒本身滴度不够,可以考虑增加MOI,同时细胞密度控制在百分之二三十左右转染
« 2017-02-04
回复了主题 › AAV大神，打小鼠脑子，一般打多少AAV？
1-5 μL用来打脑子即可
« 2017-01-19
回复了主题 › 跟AAV相关的一个问题
很多,所以AAV检测滴度是qPCR检测基因组而不是用ELSA法检测外面蛋白,就是排除空壳病毒,空病毒多了，代表纯度不高，会有很多问题
« 2017-01-19
回复了主题 › 用pspax pmd2G 三个质粒比例多少啊？
1 μg pLKO.1 shRNA plasmid750 ng psPAX2 packaging plasmid250 ng pMD2.G envelope plasmid
« 2017-01-19
创建了主题 › 跟AAV相关的一个问题
跟AAV相关的一个问题
« 2017-01-19
回复了主题 › pmd2G 、pspax2和CD513B-1 是否配套？
可能滴度低，用来感染293t试试，293t很好感染的，
« 2016-12-29
创建了主题 › 做慢病毒包装用lip2000转染，一个六孔板大概用量多少？求各位给个值或者范围，谢谢~
做慢病毒包装用lip2000转染，一个六孔板大概用量多少？求各位给个值或者范围，谢谢~
« 2016-12-21
创建了主题 › 有没有人出现过转染siRNA后，mRNA水平降低，但蛋白水平没啥变化？
有没有人出现过转染siRNA后，mRNA水平降低，但蛋白水平没啥变化？
« 2016-12-19
回复了主题 › 用流式测试凋亡，但是细胞已经带有GFP，该用什么试剂呢？那检测线粒体膜电位呢？
流式检测凋亡用AnneinV-PE,检测线粒体膜电位用TMRM/TMRE或者罗丹明
« 2016-12-15
回复了主题 › 稀释嘌呤霉素，可以放置多久？
最好现配现用吧, 如果真要这样放，一周之内，不要放太长时间
« 2016-12-13
创建了主题 › 稀释嘌呤霉素，可以放置多久？
稀释嘌呤霉素，可以放置多久？
« 2016-12-13
