基于Cre-loxp原理的敲除小鼠是如何构建的
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云梦
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1)构建Flox小鼠:将Loxp序列插入到需要删除DNA基因组的两端,这一区域称为Flox区,获得的小鼠称为Flox小鼠,其基因功能在正常情况下保持不变。
2)选择Cre工具鼠或Cre工具腺相关病毒:根据实验需求,选择具有组织或细胞特异性启动子的Cre工具鼠或表达Cre的AAV病毒,Cre小鼠或AAV-Cre能够在特定组织或细胞中表达Cre重组酶。
3)筛选:将Flox小鼠与Cre工具鼠进行杂交,通过多代交配筛选出同时携带Flox基因和Cre基因的小鼠,这些小鼠在特定组织或细胞中,当Cre重组酶表达时,会实现特异性敲除;或者在Flox小鼠中注射AAV-Cre的病毒,也可以实现目的基因的条件性敲除。