模拟磷酸化，一般是将磷酸化的位点突变为天冬氨酸（D
不能在显微镜下观察，Luc分为
一般干扰miRNA有2
一般是两种AAV各取一半的体积，混合之后注射，可以试一下，效果不好可以增加体积。
thp-1细胞一般是悬浮圆形生长，具有一定的密度依赖性，密度较低时生长较慢，当贴壁细胞比例高于20%
常规的慢病毒载体上一般是带有红色荧光蛋白和绿色荧光蛋白；常规的流式检测凋亡用的试剂是AnnexinV-FITC和
有文献报道CMV在干细胞中有沉默的风险，不是
我细胞连续多次传代后，细胞增殖速度明显减慢了，感觉不怎么长的样子，这种状态已经有一两周了，这是什么原因啊？
做miRNA与靶基因互作验证时，为什么可以将目的基因靶序列做一定长度的任意拼接截短，而转录因子和启动子互作验证时则不适合呢？
想请教一下，我想过表达的目的基因的CDS区序列中间发现有终止密码子，但查资料说这并不是终止信号，那我正常把
我分装病毒的时候是用普通无菌EP管分的，这会有影响吗？需不需要用无菌无酶的管子呢？
WB结果种无条带信号，可以从抗体、抗原、实验操作和缓冲液这几个方面分析。1）抗体：
蛋白质琥珀酰化修饰是新近发现的一种蛋白质翻译后修饰，是琥珀酰基供体通过酶学或者非酶学的方式将琥珀酰基基团共价结合到赖氨酸残基的过程。将修饰位点K突变为
包装AAV病毒使用的是驯化的用于包装AAV
HEK293 细胞中转入 S
想问下，启动子和转录因子验证的，假设存在结合作用，那么把启动子序列上的结合位点进行突变后，LUC值是不是会降低呢？
建议前体过表达，因为做microRNA的前体可以很好地模拟成熟体的一个成熟过程，如果单独的把Mir成熟体过表达，鉴于其比较短的特征在体内可出现被降解的风险，所以无特殊情况下做前体过表达更好。
FLAG一般建议放在蛋白质C端。理论上N端和C端都是可以放的，只不过蛋白质N端一般会有一些信号肽和重要的功能结构域，Flag放N端对蛋白功能影响可能会较大，所以一般不放在N端。
AAV 一般是可以维持3 个月到半年，在这个时间内理论上都有干扰/过表达效果，但是不排除特殊情况下部分AAV 一个月后可能就检测不到了，或者是到3个月的时候效果有下降，毕竟同一管病毒里面不同病毒颗粒的特性也有所差别。
可以从以下几个方面尝试提高慢病毒的感染效率：
1. 减少感染时培养基的体积；
2. 培养基中加入 5~8 μg /ml 的 Polybrene；
3. 可以适当增大MOI；
4. 延长病毒感染的时间。
RNAi 是针对转录水平的调控，到蛋白多一步翻译，某些情况下不能保证完全与蛋白水平一致：
1）该蛋白的半衰期比较长，这个需要用测定半衰期的方法检测，具体是用一些蛋白合成抑制剂处理后，隔一定时间检测该蛋白的水平；
2）该蛋白有多种转录本，可能有不同 isoform 的蛋白，要确定下是不是 siRNA是针对所有的转录本；
3）另外最后的可能就是该基因的翻译效率较高，较少 mRNA 仍能维持较高的蛋白水平。
GFP慢病毒感染细胞后，荧光强度取决于病毒进入到细胞的颗粒数、细胞本身的增殖状态、细胞类型、观察时间、
需要稀释病毒时，将病毒取出置于冰浴融解后，使用PBS或培养目的细胞用的无血清培养基
感染悬浮或半悬浮细胞，通常需要通过平角离心转染法提高感染效率。若由于实验条件有限，没有平角离心机，可用离心管代替，将细胞吹打吸入离心管中，进行低速离心，去掉大部分上清，然后加入适量的病毒液，轻轻吹打混匀5-10下，室温放置
包括：包膜质粒：pMD2.G，编码VSV-G；包装质粒：编码Gag，PoI，Rev与Tat基因；目的基因质粒：含有病毒的LTRs和psi包装信号，除非有内部启动子，否则这个目的质粒的目的基因是由5'LTR驱动的，它是一个弱启动子，需要Tat元件 的来激活它。第2代慢病毒目的质粒必须要用第2代慢病毒包装系统，不能用第三代的包装系统，因为它的LTR是Tat依赖性的，而第三代删除了tat元件。
从mRNA到蛋白，也就是从转录到翻译，并不是