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梧桐树下

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最后活动于9 天前
回复了主题  › AAV靶向肌肉的注射方式有哪些?

靶向肌肉分为2种注射方式,原位注射和系统性注射。原位注射包括:肌肉注射、经静脉肢体灌注、冠状动脉内灌注、循环输送、心内膜注射;系统性注射包括腹腔注射和静脉注射。


«  9 天前
回复了主题  › 克隆载体和表达载体有什么区别?

克隆载体(cloning vector)是指具有克隆载体的基本元件(复制起始位点,抗性基因,多克隆位点等),可以携带DNA片段或外源基因进入受体细胞并能够大量复制从而实现外源基因扩增的载体。表达载体(expression

«  9 天前
回复了主题  › CRISPR/Cas13有哪些应用?

CRISPR/Cas13系统是目前发现的唯一能够降解RNA的蛋白,相较于RNA干扰技术,Cas13介导的基因沉默具有更高的特异性和敲除效率。其作用机制与CRISPR/Cas9

«  9 天前
回复了主题  › 养的细胞长的很好,冻存后复苏细胞状态不好养不起来,是什么原因?

有可能是冻存细胞的环节出现了问题:当细胞冷到零度以下时,细胞器脱水,细胞中可溶性物质浓度升高,并在细胞内形成冰晶,冰晶的大小对细胞的影响是不同的,大冰晶容易造成细胞膜、细胞器的损伤和破裂,因此,会造成复苏出来的细胞存活率低、状态等与冻存前差异很大。我们在冻存细胞时需要有几点注意事项:

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«  9 天前
回复了主题  › siRNA用于动物体内实验的策略有哪些?

动物体内生理环境比较复杂,需要提高siRNA在体内的稳定性、半衰期、靶向性、纯度、药活性以及降低毒性后才能用于体内实验,采用增强稳定性和透膜效率的化学修饰(如2’-oMe\Chol等)的siRNA可达到更好的效果。siRN

«  2024-05-17
回复了主题  › 常用的研究转录因子和靶基因启动子研究的技术手段有哪些?

目前用于研究转录因子于靶基因启动子结合的实验有:chip-qPCR;双荧光素酶实验;酵母单杂交点对点验证;凝胶阻滞实验EMSA。


«  2024-05-17
回复了主题  › dCas9有哪些应用?

Cas9的核酸酶剪切活性取决于两个结构域:RuvC和HNH,它们分别负责切割DNA链的两条链,将这两个保守的核酸内切酶结构域进行突变,其中RuvC催化结构域的第

«  2024-05-17
回复了主题  › gRNA的设计有哪些原则?

设计高效编辑的gRNA序列是cas9-gRNA敲除实验的关键,通常需要满足以下设计原则:

  1)靶位点应设计在外显子上,在基因上

«  2024-05-17
回复了主题  › 双分子荧光互补技术是什么?

双分子荧光互补(Bimolecular fluorescence complementation, BiFC),该技术是利用荧光蛋白的特点来研究蛋白的相互作用。荧光蛋白可从特定的位点被分开,产生两个非荧光活性片段。当两片段分别被融合到相互作用的蛋白上时,会因蛋白的相互作用力而被拉近、发生互补从而重新构建成有活性的荧光蛋白并在激发光下产生荧光。因此利用荧光显微镜就可以直接通过观察

«  2024-04-28
回复了主题  › 生物实验中常用的载体是如何分类的?

常用的载体可以按照属性、进入受体细胞的类型以及功能进行分类:

① 按照属性分为病毒载体和非病毒载体

«  2024-04-28
回复了主题  › 研究蛋白互作的常用实验方法有哪些?

研究蛋白互作的方法很多,大概分为如下几种:① 酵母双杂交技术:主要用于互作蛋白的筛选;② 免疫共沉淀;③ 免疫荧光共定位;④ GST Pull-down;⑤

«  2024-04-28
回复了主题  › 我想研究蛋白的修饰,比如磷酸化、乙酰化、乳酸化、琥珀酰化等,如何外源性的模拟修饰或去修饰呢?

蛋白磷酸化一般是发生在某个氨基酸上,① 磷酸化一般发生在丝氨酸(S)、苏氨酸(T)以及酪氨酸(Y),外源性的模拟磷酸化可以将S/T/Y

«  2024-04-28
回复了主题  › siRNA可以用于动物体内实验吗?

siRNA可用于体内实验,但是动物体内生理环境比较复杂,需要提高siRNA在体内的稳定性、半衰期、靶向性、纯度、活性以

«  2024-03-29
回复了主题  › tsRNA是什么?过表达和干扰如何做?

tRNA来源的小RNA(

«  2024-03-29
回复了主题  › AAV靶向肝脏有哪些策略?

AAV8和AAV9血清型对肝脏均具有较好的嗜性,目前应用在

«  2024-03-29
回复了主题  › 钙成像技术是什么?有哪些研究工具?

钙成像技术是利用特殊的荧光染料或钙离子指示剂,将神经元中钙离子浓度的变化通过荧光强度表现出来(即将看不见的钙离子信号变成看得见可检测的荧光信号),通过对钙离子变化的快速成像,反应神经元的活性变化。

目前使用比较多的钙离子指示剂主要包括化学荧光指示剂和荧光蛋白指示剂两大类。

«  2024-03-29
创建了主题  › 什么是荧光共振能量转移?


«  2024-03-22
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