miRNA干扰则基本上不适合用qPCR检测敲低水平,它
现在很少用了,一般不是太必要可以不做。它的目的是作为阴性对照,即使自噬存在的情况下突变型的LC3也不会形成荧光斑点;如果LC3
腺相关病毒载体整合几率低,分子量小,免疫原性低,因此安全性高。即使用于人体,也被认为是安全性非常高的一类基因治疗载体。
ChIP实验首选用ChIP级抗体,是实验成功的关键因素
垂悬碱基是指在核苷酸序列的端点处存在的不能与mRNA序列相应位置互补的碱基,在实验中,垂悬碱基的存在使端点处更容易发生解链,从而增加基因沉默效率。另一
实际上慢病毒和腺病毒都可以用于过表达lnc
当我们已知蛋白结合的DNA序列的时候,可以使用PCR
石蜡切片没法直接观察荧光蛋白的荧光情况,因为在制片的过程中经过多种有机溶剂处理后,会导致荧光蛋白结构改变,无法被激发出荧光;但可以通过免疫荧光染色观察。如果想直接观察到荧光,可以做冰冻切片。
感染心脏巨噬细胞建议采用原位注射,效果会比尾静脉注射好很多;另外目标细胞是心脏中的巨噬细胞,取心脏组织做检测并不能反映真实的情况,建议是将巨噬细胞从心脏组织中分离出来再针对巨噬细胞做检测。
天然U6 snRNA
质粒可以随机整合在基因组,但是质粒转染细胞效率不如慢病毒高,且整合概率极低,且容易出现随着细胞传代外源基因丢失的情况。而慢病毒因其感染效率高,且可以长期稳定的整合在基因组,在构建及筛选过程中相比质粒工作量要少一些,且细胞具有在后续传代过程中也不容易丢失。