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云梦

用户名:云梦

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主题数: 52     回贴数: 44

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最后活动于10 天前
«  10 天前
创建了主题  › CRISPR/Cas13有哪些应用?


«  10 天前
«  10 天前
回复了主题  › 追踪肿瘤细胞在动物体内的转移,有方法可以做到吗?

可以采用活体成像技术,前提是需要给肿瘤细胞带上荧光标记,可以是荧光素酶或者荧光蛋白标记都可以;另外,活体成像仪的光谱检测范围要在所带荧光标记的光谱范围内。

«  25 天前
回复了主题  › 做免疫沉淀(IP)实验时,最后沉淀下来的目的蛋白量较低,一般是什么原因导致的?有什么建议吗?

IP拉下来的目的蛋白量较少主要可能是三个原因:①可能是IP抗体的亲和力不足;②另一个原因可能是目的蛋白本身的表达量较低;③裂解细胞时蛋白被降解。如果是抗体的问题,就需要更换新抗体

«  25 天前
回复了主题  › 我想用AAV感染骨髓中的巨噬细胞,采用尾静脉注射可以吗?

AAV感染骨髓不推荐采用尾静脉注射,很难感染到骨髓腔内,更建议采用骨内注射。

«  25 天前
«  25 天前
创建了主题  › gRNA的设计有哪些原则?


«  2024-05-16
创建了主题  › dCas9有哪些应用?


«  2024-05-16
«  2024-05-16
回复了主题  › 做western blot跑蛋白发现条带大小跟理论值不一致,可能是什么原因?

WB的目的蛋白条带与理论值不一样,可能的原因有以下几个:

«  2024-05-11
回复了主题  › 请问做Co-IP时,Input的条带不够明显,可以怎么解决?

如果排除实验操作问题的话,可能是因为细胞本身的蛋白表达量低,可以采用外源性过表达提高目的蛋白的表达量。

«  2024-05-11
回复了主题  › 用自噬双标病毒感染细胞观察自噬时,最终的结果应该怎么统计,是统计绿光和红光的细胞个数吗?

不是的。建议使用激光共聚焦显微镜来观察,将绿光和红光的细胞图像merge后,统计单个细胞内的红色荧光点数和黄色荧光点数,然后计算它们的比值即可反映自噬流的情况。

«  2024-05-11
回复了主题  › 用AAV做体内过表达时,检测目的基因的表达效果不太理想,有的甚至没有过表达,这种可能会是哪些原因导致的呢?

AAV应用时效果不理想的有关影响因素很多,从病毒本身到检测目的基因表达这些过程都有涉及,具体可以从以下几个方面来分析:

«  2024-05-11
«  2024-04-28
«  2024-04-28
«  2024-04-28
回复了主题  › 目的蛋白与Flag标签融合表达,用western blot(WB)检测Flag时,正常情况下对照组细胞应该是没有条带才对,为什么我的对照也出现条带了呢?

对照也检测到Flag标签可能有两个原因:一个可能是抗体的非特异性结合,导致出现非特异性条带,建议更换特异性较好的抗体;另一个可能是蛋白样品存在交叉污染,注意优化细胞培养、提蛋白及上样时

«  2024-04-19
回复了主题  › 细胞感染慢病毒传代后出现大量死亡的情况,是怎么回事?传代前还好好的呢

如果排除调控目的基因会致死的原因,这种情况很可能跟细胞状态有很大关系,即在感染前后细胞状态就已经下降,此时还未表现出大量死亡的现象,但一经消化传代后,细胞状态也在持续下降,导致可能出现有大量细胞飘起或不再贴壁。因此进行感染前要注意将细胞状态先调整好,例如适当提高血清浓度、定时换液等操作;或是选用状态好的细胞。

«  2024-04-19
回复了主题  › 想问下有没有检测分子伴侣介导自噬的工具病毒?有的话原理是什么呢?

有的。分子伴侣介导自噬(CMA)的底物中均含有一个能被分子伴侣HSC70

«  2024-04-19
回复了主题  › 我计划用CCK-8试剂盒检测待测药物对目的细胞增殖的影响,但这个药物处理是带有颜色的,是否会影响实验结果呢?

CCK-8试剂盒不适合用于检测含有色素或颜色的样品,可能会影响检测结果;另外含有还原剂的样品在加入CCK-8

«  2024-04-19
«  2024-03-29
«  2024-03-29
创建了主题  › AAV靶向肝脏有哪些策略?


«  2024-03-29
«  2024-03-29
回复了主题  › 腺相关病毒(AAV)可以实现体内的基因调控,那是否意味着也可以做基因敲除呢?

答案是可以的,但是有风险、有条件的。通过AAV利用Crispr/Cas9技术做在体敲除,理论上可以实现但实

«  2024-03-22
«  2024-03-22