什么是分子克隆（Molecular cloning）？

分子克隆（Molecular cloning）是指通过将目的基因插入合适的载体形成重组DNA，并指导其在宿主体内获得多个复制品的实验方法。

具体可分为五个步骤。

一是获取目的基因。可以通过基因文库筛选目的基因、逆转录合成cDNA、从染色体DNA中分离目的基因和直接人工合成DNA序列等方法来获取目的基因。

二是选择克隆载体和完成载体的线性化。根据实验目的，选择克隆载体、表达载体和穿梭载体之一，将载体进行线性化。

三是连接目的基因和载体。可通过基于限制性核酸内切酶和T4DNA连接酶的传统技术来完成目的基因和载体的酶切连接。也可通过基于同源重组技术的载体线性化和无缝克隆连接来实现目的。

四是转化。将重组DNA质粒通过热激法导入感受态细胞来进行扩增和保存。

最后是进行筛选和鉴定。使用含抗生素的LB固体培养基进行筛选，之后挑取单菌落培养，进行PCR鉴定，获得阳性克隆菌株。