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小脑斧123

用户名:小脑斧123

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最后活动于20 å¤©å‰
回复了主题  â€º å¦‚何筛选稳转株?

有两种方法,一种是通过真核细胞抗性药物筛选;一种是让细胞带上荧光信号,利用流式细胞仪分选得到荧光信号阳性的细胞,扩大培养

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回复了主题  â€º ç—…毒应该怎么保存呢?保存多长时间?能够反复冻融病毒吗?

如果是短期内使用,4℃可以保存一周左右。

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回复了主题  â€º ä»€ä¹ˆæ˜¯MOI?如何根据MOI计算要加病毒的体积?

MOI(multiplicity of infecti

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回复了主题  â€º mRNA敲除验证时PCR与WB蛋白结果不一致该信谁呢?

基因敲除一般分为两种情况:一种是把目的基因的DNA外显子编码序列全部敲除;第二种是敲除外显子上部分编码蛋白的序列,因为敲除的外显子序列为非三的整数倍,所以这种情况会造成蛋白翻译移码突变,从而进一步实现了相应蛋白功能的敲除。因此如果通过对目标序列进行

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创建了主题  â€º Lip2000和Lip3000的区别是什么?


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回复了主题  â€º 2.设计qPCR引物需不需要跨内含子设计?

qPCR引物最好跨内含子设计

«  2023-08-23
回复了主题  â€º æ¶ˆåŒ–细胞所用的胰蛋白酶怎么选择?其成分中的EDTA有什么作用?

贴壁不牢和半贴壁细胞尽量使用浓度0.05%不含EDTA的胰酶

«  2023-08-23
«  2023-08-23
创建了主题  â€º å¦‚何选择细胞培养瓶?


«  2023-08-17
«  2023-08-17
回复了主题  â€º ç»†èƒžè½¬æŸ“效率低的原因是什么呢?

影响转染效率的因素主要有以下几点:

细胞因素,细胞的状态对转染效率的影响较大。要确保细胞未被污染以及细胞处在对数期。如果是贴壁细胞的话,贴壁率应该在50%~70%。转染时细胞密度过高或者过低都会导致转染效率降低,乃至表达水平偏低。

«  2023-05-19
回复了主题  â€º ç»†èƒžè½¬æŸ“后如何进行转染效率的验证?

一般在转染24-72h之间可以进行转染效率的观察验证。

最简单直接的方法是通过荧光观察。一般可以通过质粒载体上的荧光蛋白基因,或者小干扰RNA带的荧光基团,来通过荧光显微镜观察细胞

«  2023-05-19
回复了主题  â€º ç»†èƒžè½¬æŸ“试剂如何选择?
«  2023-05-19
回复了主题  â€º éžå¸¸è§„的转染体系如何操作?

当多质粒共转染时,可以将质粒按照一定的比例进行混合,之后根据核酸总量再与转染试剂按照合适的比例混合配置即可。

当需要DNA和RNA共转染时,可以使用DNA转染试剂,如果单独转RNA,建议使用RNA专用转染试剂。

«  2023-05-19
回复了主题  â€º ç»†èƒžè½¬æŸ“试剂如何选择?

针对siRNA的转染可以选择RNA专用转染试剂RNAFit。针对质粒DNA的转染可以选择LipoFiter转染试剂,改转染试剂适用于普通细胞系转染,具有低细胞毒性的特点。高级版的LipoFiter 3.0高效转染试剂,适用于普通细胞系和难转染细胞系,具有极高的转染效率。如果有慢病毒包装的实

«  2023-05-19
«  2023-04-21
回复了主题  â€º è¿›è¡Œç»†èƒžè½¬æŸ“后如何验证转染效率?

一般在转染24-72h之间可以进行转染效率的观察验证。

最简单直接的方法是通过荧光观察。一般可以通过质粒载体上的荧光蛋白基因,或者小干扰RNA带的荧光基团,来通过荧光显微镜观察细胞

«  2023-04-07
回复了主题  â€º ç»†èƒžè½¬æŸ“时是否需要使用无血清、双抗的培养基?

血清一度曾被认为会降低转染效率,在开始准备DNA和阳离子脂质体试剂稀释液时要使用无血清的培养基。血清中含有大量的蛋白质,在转染过程中,带负电的蛋白质可能干扰阳离子脂质体/阳离子聚合物对核酸的吸附,影响转染效率。但在复合物形成后,在加入细胞中前可以加入血清。当然,最好是按照转染试剂说明书的要求来进行操作。

«  2023-04-07
回复了主题  â€º è½¬æŸ“前细胞需要怎样的状态和密度呢?

细胞的生长状态会直接影响转染效果。转染前细胞最好经过1-2次传代,细胞良好的生长状态有助于提高转染效率。有些细胞系传代很多次还能够保证很高的转染效率,而其他一些细胞系则传代很少次数转染效率就有显着降低,值得注意的是,贴璧细胞一旦长满就不容易转染了。

用于转染的细胞密度根据不同的细胞类

«  2023-04-07
回复了主题  â€º ç»†èƒžè½¬æŸ“前核酸如何准备 ?

外源核酸的质量直接影响到转染效率从而影响到实验结果。

一般来说,用于转染级别的质粒一定要高纯度、高浓度、且无内毒素。浓度要求不低于500ng/ul,1000 ng/ul为宜,OD260/280>1.8。

«  2023-04-07