原理，利用短暂的电脉冲电击细胞，使细胞膜被击穿小孔，核酸物质（DNA或RNA）在电泳力的作用下进入细胞膜，随后细胞本身的机制使这些物质到达细胞核处。
步骤，用胰酶消化待要电转染的细胞，最后使用电转缓冲液重悬细胞，加入核酸物质并混匀，然后将其放入提前准备好的电转杯中，随后将电转杯装在提
原理，脂质体介导的转染法是一种十分常用的转染方式。阳离子脂质体表面带正电荷，能与核酸的磷酸根通过静电作用，将核酸分子包裹入内，形成DNA脂质体复合物，被表面带负电的细胞膜吸附，再通过融合或细胞内吞作用进入细胞。
步骤，将核酸分子（
瞬时转染，即外源基因不整合到宿主染色体中，一个宿主细胞中可存在多个拷贝数，产生高水平表达，但通常只持续几天，一般在转染后24~72h小时内即可对结果进行分析。
稳定转染，外源DNA
转染，是将外源基因导入细胞内的一种专门技术。常用的转染方法有物理方法、化学方法、生物方法。
物理介导方法：电穿孔法、显微注射法等。
化学介导方法：如经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法等。
1. siRNAs是短的RNA双链，在3’端有两个碱基的游离。
2. shRNA由正义链和反义链通过环状序列（loop）隔开共同组成。
3. shRNA 用于插入表达载体(如慢病毒载体)。
虽然siRNA和shRNA都可用于蛋白沉默，但它们的作用机制有所不同。不管是长的双链shRNA还是短的约21bp碱基对的双链siRNA都能够直接被转运到组织培养的细胞中。有一些报道提到siRNA在转染细胞时是被转运到细胞核中的，但更普遍的看法是它们在细胞质中聚集。 长的双链shRNA与Dicer一起形成复合物，双链特异性的核糖核酸酶III能够将它们处理成带有两个游离碱基的长度为21-23nt的si
RNA干扰(RNA interference，RNAi)是指沉默或抑制目标基因表达的过程，指内源性或外源性双链RNA(dsRNA)介导的细胞内mRNA发生特异性降解，从而导致靶基因的表达沉默，产生相应的功能表型缺失的现象。
RNA干扰由转运到细胞质中的双链RNA激活。有由小干扰RNA（siRNA）或短发夹RNA（shRNA）诱导实现靶mRNA的降解，或者通过小RNA（miRNA）诱导特
1. 其根本区别是miRNA是内源的，是生物体固有的；而siRNA是人工体外合成的，通过转染进入人体内。
2. 结构上，miRNA是单链RNA，而siRNA是双链RNA。
3. Dicer酶对二者的加工过程不同，miRNA是不对称加工，miRNA仅是剪切pre-miRNA
1. 提高 sgRNA 特异性。在设计 sgRNA 序列时，可选择 GC 含量在 50%~70%
2. 控制 Cas9-sgRNA 用量。
3. 选择合适的递送载体。
使用pSpCas9质粒通常导致更高的切割效率。PCR产生的U6-sgRNA的使用表达盒可以方便快速地比较sgRNA的效率，从而在两者方面获得最佳的sgRNA在随后克隆到pSpCas9中之前。
尽管最初报道了具有截短的tracrRNA 3′末端的sgRNA，即sgRNA（+48），与使用crRNA和tracrRNA对22相比，在哺乳动物细胞中的基因靶向效果较差，但通过扩展其tracrRNA末端，优化了sgRNA结构。用于pSpCas9载体的sgRNA（+85）能够介导基因组修饰的最高效率。
CRISPR-Cpf1与先前的Cas9有一些区别，对研究和治疗具有重要意义。
首先，DNA切割酶Cas9以其天然形式与两个小RNA形成复合物，这两个小RNA都是切割活性所必需的。Cpf1系统更简单，因为它仅需要一个RNA。Cpf1酶也比标准SpCas9小，从而更易于传递到细胞和组织中。
其次，也是最重要的一点，Cpf1以不同于Cas9的方式切割DNA。当Cas9复合物切割DNA时，它会在同一位置切割两条链，留下“平末端”，这些末端通常在重新结合时会发生突变。使用Cpf1复合物时，两条链上的切割是错位的，在暴露的末端留下短的突出端。预期这将有助于精确插入，从而使研究人员可以
通过使用含有靶位点的质粒和ssODN可以实现HDR。然而，单个碱基可以无声地突变以防止模板断裂。
CBh启动子是CAG启动子的变体，在以下细胞系中对其进行了验证：HEK 293FT、人ESCs、小鼠ESCs、HepG2、HeLa和Neuro 2a。对于其他细胞系，建议使用pSpCas9（BB）-2A-GFP检测Cas9表达并检查绿色荧光，或使用与Cas9 N端融合的3×FLAG表位抗体染色Cas9表达。
