有两种方法，一种是通过真核细胞抗性药物筛选；一种是让细胞带上荧光信号，利用流式细胞仪分选得到荧光信号阳性的细胞，扩大培养

如果是短期内使用，4℃可以保存一周左右。

MOI（multiplicity of infecti

基因敲除一般分为两种情况：一种是把目的基因的DNA外显子编码序列全部敲除；第二种是敲除外显子上部分编码蛋白的序列，因为敲除的外显子序列为非三的整数倍，所以这种情况会造成蛋白翻译移码突变，从而进一步实现了相应蛋白功能的敲除。因此如果通过对目标序列进行

zsGreen可以活体成像观察，但是

qPCR引物最好跨内含子设计

贴壁不牢和半贴壁细胞尽量使用浓度0.05%不含EDTA的胰酶

感染复数（MOI）

影响转染效率的因素主要有以下几点：

细胞因素，细胞的状态对转染效率的影响较大。要确保细胞未被污染以及细胞处在对数期。如果是贴壁细胞的话，贴壁率应该在50%~70%。转染时细胞密度过高或者过低都会导致转染效率降低，乃至表达水平偏低。

一般在转染24-72h之间可以进行转染效率的观察验证。

最简单直接的方法是通过荧光观察。一般可以通过质粒载体上的荧光蛋白基因，或者小干扰RNA带的荧光基团，来通过荧光显微镜观察细胞

当多质粒共转染时，可以将质粒按照一定的比例进行混合，之后根据核酸总量再与转染试剂按照合适的比例混合配置即可。

当需要DNA和RNA共转染时，可以使用DNA转染试剂，如果单独转RNA，建议使用RNA专用转染试剂。

针对siRNA的转染可以选择RNA专用转染试剂RNAFit。针对质粒DNA的转染可以选择LipoFiter转染试剂，改转染试剂适用于普通细胞系转染，具有低细胞毒性的特点。高级版的LipoFiter 3.0高效转染试剂，适用于普通细胞系和难转染细胞系，具有极高的转染效率。如果有慢病毒包装的实

一般在转染24-72h之间可以进行转染效率的观察验证。

最简单直接的方法是通过荧光观察。一般可以通过质粒载体上的荧光蛋白基因，或者小干扰RNA带的荧光基团，来通过荧光显微镜观察细胞

血清一度曾被认为会降低转染效率，在开始准备DNA和阳离子脂质体试剂稀释液时要使用无血清的培养基。血清中含有大量的蛋白质，在转染过程中，带负电的蛋白质可能干扰阳离子脂质体/阳离子聚合物对核酸的吸附，影响转染效率。但在复合物形成后，在加入细胞中前可以加入血清。当然，最好是按照转染试剂说明书的要求来进行操作。

细胞的生长状态会直接影响转染效果。转染前细胞最好经过1-2次传代，细胞良好的生长状态有助于提高转染效率。有些细胞系传代很多次还能够保证很高的转染效率，而其他一些细胞系则传代很少次数转染效率就有显着降低，值得注意的是，贴璧细胞一旦长满就不容易转染了。

用于转染的细胞密度根据不同的细胞类

外源核酸的质量直接影响到转染效率从而影响到实验结果。

一般来说，用于转染级别的质粒一定要高纯度、高浓度、且无内毒素。浓度要求不低于500ng/ul，1000 ng/ul为宜，OD260/280>1.8。