å¯åЍ忴»æ€§éªŒè¯ï¼Œå¿…é¡»è¦è¿‡è¡¨è¾¾ä¸€ä¸ªè½¬å½•å› å么?
腺相关病毒(AAV) 注射一次在多长时间内都有敲低/过表达的效果?
慢病毒如何整åˆåˆ°åŸºå› 组?
慢病毒(lentivirus)感染细胞è§å…‰è¡¨è¾¾è¾ƒå¼±ï¼Ÿæˆ‘应该怎么办
慢病毒感染效率低怎么办,如何æé«˜æ…¢ç—…毒感染效率?
慢病毒感染åŽç»†èƒžçжæ€å¼‚å¸¸çš„åŽŸå› æœ‰ä»€ä¹ˆï¼Ÿ
用于慢病毒感染的细胞接ç§é‡å¤šå°‘æ‰åˆé€‚呢?
WB 蛋白æ¡å¸¦å¤§å°ä¸Žç†è®ºå€¼ä¸ç¬¦ï¼Œå¯èƒ½æ˜¯ä»€ä¹ˆåŽŸå› ï¼Ÿ
è§å…‰ç´ é…¶å’Œè§å…‰è›‹ç™½çš„æ£€æµ‹ä»ªå™¨ç›¸åŒå—?是一ç§ä¸œè¥¿å—?fluc是哪一ç§ï¼Ÿ
介ç»ä¸‹ä»€ä¹ˆæ˜¯DIO系统,是怎么è¿ä½œçš„ï¼ŒåŽŸç†æ˜¯ä»€ä¹ˆï¼Ÿ
活体æˆåƒæŽ¨è什么病毒,腺相关病毒(AAV)å¯ä»¥å—?有什么è§å…‰è›‹ç™½èƒ½ä½¿ç”¨ï¼Ÿæˆ‘看有用è§å…‰ç´ 酶(luc)和è§å…‰è›‹ç™½çš„æ¯”如EGFPã€zsGREEN
AAV-BBB的血清型能é€è¿‡è¡€è„‘å±éšœæ„ŸæŸ“大脑的,AAV的其他血清是ä¸å…·å¤‡è¿™ä¸ªç‰¹æ€§ï¼Œç”¨AAV-BBBæºå¸¦shRNAå°¾é™è„‰æ³¨å°„å³å¯
ç¨³è½¬æ ªéƒ½æ˜¯ç”¨ä»€ä¹ˆç—…æ¯’åšçš„ï¼Ÿä¸€èˆ¬ç¨³å®šæ ªæ€Žä¹ˆç›é€‰ï¼Ÿ
Cas9 çš„æ ¸é…¸é…¶å‰ªåˆ‡æ´»æ€§å–决于两个结构域:RuvC å’Œ HNH。这两个结构域分别负责切割
DNA 链的两æ¡é“¾ï¼Œå¹¶ä¸”这两个结构域能够å•独地被人工点çªå˜å¤±æ´»ã€‚两ç§çªå˜ä½“çš„ Cas9 ä»
ç„¶å…·æœ‰æ ¸é…¸é…¶æ´»æ€§ï¼Œå¯å¯¹é¶å‘åºåˆ—进行剪切作用。当 RuvC å’Œ HNH åŒæ—¶å¤„äºŽå¤±æ´»çŠ¶æ€æ—¶ï¼ŒCas9å°†ä¸å…·æœ‰æ ¸é…¸é…¶æ´»æ€§ï¼Œæˆä¸º dCas9(dead Cas9)。dCas9 虽然没有剪切 DNA 的能力,但ä»ç„¶å¯ä»¥ä¿ç•™ç”± gRNA&nbs
pAAV-RC:Rep在病毒å¤åˆ¶ã€åŸºå› 表达调控åŠå®¿ä¸»æŸ“色体定点整åˆã€ç—…毒包装ä¸èµ·é‡è¦
作用。Cap通过ä¸åŒçš„翻译起始åç¼–ç 生æˆåŒ…装病毒的外壳。ä¸åŒè¡€æ¸…型的主è¦åŒºåˆ«åœ¨äºŽè¡£
壳蛋白Cap çš„ä¸åŒï¼Œå¹¶å†³å®šå„ç§è¡€æ¸…åž‹ AAV 对ä¸åŒç»„织和细胞有ä¸åŒçš„æ„ŸæŸ“效率。应用 AAV2çš„ ITR 以åŠå…¨éƒ¨æˆ–部分 AAV2 çš„ rep 蛋白,æ¢ä¸Šå…¶ä»–血清型 AAV çš„ cap 蛋白,å¯ä»¥å¾—到具有å„血清型感染特å¾çš„æ‚åˆ AAV 载体。
ä¸åŒAAV血清型具有ä¸åŒçš„衣壳蛋白空间结构ã€åºåˆ—å’Œç»„ç»‡ç‰¹å¼‚æ€§ï¼Œå› è€Œå…¶è¯†åˆ«ä¸Žç»“åˆçš„细胞表é¢å—体也相应有很大差别,这也导致ä¸åŒè¡€æ¸…型转染的细胞类型和感染效率也å„ä¸ç›¸åŒã€‚
å¯åŠ¨åæ˜¯RNAèšåˆé…¶è¯†åˆ«ã€ç»“åˆå’Œå¼€å§‹è½¬å½•的一段DNAåºåˆ—ï¼Œå®ƒå«æœ‰èšåˆé…¶ç‰¹å¼‚结åˆå’Œè½¬å½•起始所需的ä¿å®ˆåºåˆ—,但是它本身并ä¸ä¼šè¢«è½¬å½•。å¯åЍåä¸åŒçš„结构会导致与RNAèšåˆé…¶çš„äº²å’Œèƒ½åŠ›æœ‰æ‰€å·®å¼‚ï¼Œä»Žè€Œä¼šå¯¼è‡´åŸºå› çš„è¡¨è¾¾æ°´å¹³çš„ä¸åŒï¼Œç»„织特异性的å¯åЍååˆå«å™¨å®˜ç‰¹å¼‚性å¯åЍå,å¯ä»¥è®©æŸä¸ªåŸºå› 特异的表达在æŸç§ç»„织或者器官ä¸ï¼Œä¸Žæ„ŸæŸ“效率是没有关系的。
所以将上述两个方é¢ç»“åˆèµ·æ¥ï¼Œé¦–先有一个对组织的相对特异性感染,å†åŠ ä¸Šç‰¹å¼‚æ€§å¯åЍå在组
细胞碎片:镜下è§é»‘色æ‚质,大å°ä¸å‡ï¼Œæ¢æ¶²åŽä¸è§ï¼Œå¯èƒ½æ˜¯ç»†èƒžçжæ€ä¸å¥½ï¼ˆæ¯”å¦‚åŽŸä»£ç»†èƒžä¼ ä»£æ¬¡æ•°è¿‡å¤šï¼Œæ–°å¤è‹çš„细胞å¤è‹æ“作过程ä¸é€‚ï¼Œå†»å˜æ¡ä»¶å¯¹ç»†èƒžæŸä¼¤å¤§ï¼Œç—…毒感染MOI值过大,细胞æŸä¼¤è¾ƒé‡ï¼ŒåŸ¹å…»åŸºæ¡ä»¶ä¸é€‚,血清比例需è¦è°ƒæ•´ç‰ã€‚)。
ç»†èŒæ±¡æŸ“:细èŒåœ¨æ™®é€šå€’ç½®æ˜¾å¾®é•œä¸‹ä¸ºé»‘è‰²ç»†æ²™çŠ¶ï¼Œæ ¹æ®æ„ŸæŸ“细èŒçš„ä¸åŒï¼Œå¯æœ‰ä¸åŒçš„外形,培养液一般会浑浊å˜é»„ï¼Œå¯¹ç»†èƒžç”Ÿé•¿å½±å“æ˜Žæ˜¾ã€‚å¯¹åŸ¹å…»çŽ¯å¢ƒæ¶ˆæ¯’ï¼ŒåŠ æŠ—ç”Ÿç´ ã€‚
éœ‰èŒæ±¡æŸ“ï¼šåŸ¹å…»æ¶²æ˜¯æ¸…äº®çš„ï¼Œå€’ç½®æ˜¾å¾®é•œä¸‹æ— æ‚质,37度åµç®±åŸ¹å…»2-3å¤©ï¼Œä»æ¸…亮,但出现絮状æ‚质,镜下å¯è§å‘ˆç»†ä¸çŠ¶çš„å›¢çŠ¶æ¼‚æµ®ç‰©ï¼Œå¯çœ‹åˆ°æ˜Žæ˜¾çš„èŒä¸ï¼Œ
想敲除lncRNA,这个gRNA设计上有什么ä¸åŒå—?
RNAi干扰,mRNAå˜åŒ–明显但是wb没å˜åŒ–ï¼Œä»€ä¹ˆåŽŸå› ï¼Ÿ
活体æˆåƒçš„æ³¨å°„æ–¹å¼æœ‰å“ªäº›ï¼Œä¸€èˆ¬æ˜¯æ€Žä¹ˆé€‰æ‹©åº•物的?
åšæ´»ä½“æˆåƒæŽ¨è什么病毒
验è¯ç›®çš„åŸºå› çš„å¹²æ‰°æ•ˆçŽ‡ä¸€èˆ¬æ˜¯ç”¨qPCR的方法,但也å¯ä»¥ç”¨åŒè§å…‰é…¶ç´ æŠ¥å‘ŠåŸºå› ç³»ç»Ÿæ¥åšçš„,与验è¯mir与é¶åŸºå› 结åˆåŽŸç†ä¸€è‡´ï¼ŒæŠŠç›®çš„åŸºå› å½“æˆ
都是作为载体,将目的åºåˆ—递é€åˆ°é¶ç»†èƒžå†…部。 进入细胞方å¼ä¸ä¸€æ ·ï¼šè´¨ç²’通过转染进入目的细胞,病毒通过感染进入目的细胞,特异性更强,且效率更高; 所æè½½çš„åºåˆ—å½¢å¼åŠå…¶å‘挥功能的方å¼å¯èƒ½ä¸ä¸€æ ·ï¼šè´¨ç²’
都是作为载体,将目的åºåˆ—递é€åˆ°é¶ç»†èƒžå†…部。 进入细胞方å¼ä¸ä¸€æ ·ï¼šè´¨ç²’通过转染进入目的细胞,病毒通过感染进入目的细胞,特异性更强,且效率更高; 所æè½½çš„åºåˆ—å½¢å¼åŠå…¶å‘挥功能的方å¼å¯èƒ½ä¸ä¸€æ ·ï¼šè´¨ç²’
将病毒与293 细胞共
åšç»†èƒžæ°¸ç”ŸåŒ–推è什么病毒?