MOI：感染复数。是感染时细胞与病毒的数量比值，也就是平均每个细胞感染病毒的数量。 病毒体积= 细胞数ⅹmoi/病毒滴度，一般慢病毒 30-50 摸索，腺病毒 200 左右摸索
（1）过表达用的是 II 型启动子，是依赖 II 型 RNA 聚合酶的启动子，可以 启动长的片段，比如 CMV、EF1A 依赖 PolyA 进行转录终止
（2）干扰用的是 III 型启动子，是依赖Ⅲ型 RNA 聚合酶的启动子，比如 U6 ， H1 启动子，聚合酶Ⅲ遇到连续 4 个或 5 个 T 时,它指导的转录就会停止
共同点：都是绿色荧光蛋白，激发光和发射光都一样，激发光488nm,发射光510nm
区别：GFP 是在水母发现的，和 EGFP 的区别在于 EGFP 是 GFP 的增强版，发生了双氨基酸取代，64 位的苯丙氨酸被亮氨酸取代，65 位的丝氨酸被苏氨酸取代，与 GFP 相比，EGFP 具有更强更稳定的荧光。
不同种属间的基因过表达与干扰是否可以通用？
融合蛋白是怎么做的？ T2A 和 和 IRES 连接的怎么做？
荧光强弱跟什么有关？为什么我的荧光很弱有什么原因吗
敲除株筛选是不是直接通过抗性筛选就可以了？
如果载体带有zsgreen，就可以表达绿色荧光蛋白，这样可以在荧光显微镜下看绿色荧光。但是这个只能是观察是否感染上，就是看的是感染效率而非表达效率；如果看表达效率，需要做相应基因的QPCR和WB的。
miR理论上一般5p和3p两种成熟体形式都有，主要以一种成熟体稳定存在。hsa-mir-30a的5p是稳定的，3p
因为miR和靶基因验证的方式主要通过miR的种子区域（2-8 位）去验证结合，但是也有文献验证非种子区域结合的，这种结合还是有可能的，所以突变种子区域结合位点进一步确认，这种验证方式更被认可，去除了其他因素的影响
1）sponge是miR的重复反义序列，他是吸附在miR上导致miR发挥作用的数量减少，并非改变miR
Cas9敲除编码基因和非编码基因的区别
做microRNA干扰病毒，有哪两种方式，那种好用?
有客户在做荧光素酶的时候，已经做过小鼠的miRNA与靶基因的关系了，做人的该基因与miRNA还需要去预测验证吗？
实验中慢病毒感染效率不高的情况，要怎么解决？
蛋白标签（protein tag）是指利用DNA体外重组技术，与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白质，以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和纯化等,我们公司载体上常用的标签是 Flag，方便在 WB
ASO和siRNA均是RNA干扰技术，是沉默lncRNA手段。因为不同lncRNA在细胞中定位不同，所以两者的干扰效率不同，这就要求针对不同的lncRNA，慎重选择
Cas9的核酸酶剪切活性取决于两个结构域：RuvC和HNH。这两个结构域分别负责切割DNA 链的两条链，并且这两个结构域能够单独地被人工点突变失活。两种突变体的Cas9仍然具有核酸酶活性，可对靶向序列进行剪切作用。当
pAAV-RC：Rep在病毒复制、基因表达调控及宿主染色体定点整合、病毒包装中起重要作用。Cap通过不同的翻译起始子编码生成包装病毒的外壳。不同血清型的主要区别在于衣壳蛋白 Cap的不同，并决定各种血清型AAV
为什么 RNAi 应用于 lncRNA 的效果不理想？
能列举下常用蛋白标签有那些以及他们的用途吗，用这些标签会不会增加蛋白的相对分子量？
为什么我做实验用腺相关病毒（ aav） 体外感染效率很低 (AAV 在细胞上的表达远比不上在动物体内的表达)？
想咨询一下，你们公司小鼠逆转录病毒转染CD4 T细胞的推荐MOI是多少呀，因为试用装的体积太少，我们不够试很多梯度，能否给个参考MOI值，我们好设的窄一点，节约病毒
PAM序列不应作为sgRNA的一部分。
AAV一般是可以维持3个月到半年，在这个时间内理论上
可以，要选择化学修饰的siRNA，恰当的修饰能够增加siRNA 的体内稳定性（抵抗核酸酶降解），和对组织的亲和力。
Mimics（双链）：模拟生物体内源的miRNAs，
最简单的是可以通过puro筛选检测：于感染后72小时加入工作浓度的嘌呤霉素，培养2-3天，镜下观察，选取细胞存活率较高且细胞状态较好的组，对应为较适宜的MOI值。另外，还可以通过目的基因的qPCR、WB、免疫荧光、免疫组化等方法摸索最佳MOI。
支原体：高倍镜下见小黑点，对PH 值影响较大，细胞换液后很快培养基变黄，换液后有一定改善但是培养后继续增多，可以pcr检测鉴定
黑胶虫：高倍镜下见小黑点，做布朗运动，换液不会改善
pAAV-RC：Rep在病毒复制、基因表达调控及宿主染色体定点整合、病毒包装中起重要作用。Cap通过不同的翻译起始子编码生成包装病毒的外壳。不同血清型的主要区别在于衣壳蛋白 Cap的不同，并决定各种血清型AAV对不同组织和细胞有不同的感染效率。应用AAV2的ITR 以及全部或部分AAV2的rep蛋白，换上其他血清型AAV的cap蛋白，可以得到具有各血清型感染特征的杂合