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减肥呀减肥呀

用户名:减肥呀减肥呀

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最后活动于1 天前
回复了主题  › AAV 辅助质粒的作用是什么

pAAV-RC:Rep在病毒复制、基因表达调控及宿主染色体定点整合、病毒包装中起重要作用。Cap通过不同的翻译起始子编码生成包装病毒的外壳。不同血清型的主要区别在于衣壳蛋白 Cap的不同,并决定各种血清型AAV对不同组织和细胞有不同的感染效率。应用AAV2的ITR 以及全部或部分AAV2的rep蛋白,换上其他血清型AAV的cap蛋白,可以得到具有各血清型感染特征的杂合

«  1 天前
回复了主题  › 如何计算要加的 moi?慢病毒,腺病毒如果没有推荐的,一般建议多少摸索?

MOI:感染复数。是感染时细胞与病毒的数量比值,也就是平均每个细胞感染病毒的数量。 病毒体积= 细胞数ⅹmoi/病毒滴度,一般慢病毒 30-50 摸索,腺病毒 200 左右摸索


«  1 天前
回复了主题  › 过表达和干扰的启动子有什么区别?

(1)过表达用的是 II 型启动子,是依赖 II 型 RNA 聚合酶的启动子,可以 启动长的片段,比如 CMV、EF1A 依赖 PolyA 进行转录终止

(2)干扰用的是 III 型启动子,是依赖Ⅲ型 RNA 聚合酶的启动子,比如 U6 , H1 启动子,聚合酶Ⅲ遇到连续 4 个或 5 个 T 时,它指导的转录就会停止


«  1 天前
回复了主题  › GFP、EGFP、ZsGreen 有啥区别

共同点:都是绿色荧光蛋白,激发光和发射光都一样,激发光488nm,发射光510nm

区别:GFP 是在水母发现的,和 EGFP 的区别在于 EGFP 是 GFP 的增强版,发生了双氨基酸取代,64 位的苯丙氨酸被亮氨酸取代,65 位的丝氨酸被苏氨酸取代,与 GFP 相比,EGFP 具有更强更稳定的荧光。

«  1 天前
创建了主题  › 不同种属间的基因过表达与干扰是否可以通用?

不同种属间的基因过表达与干扰是否可以通用?

«  10 天前
创建了主题  › 融合蛋白是怎么做的?

融合蛋白是怎么做的? T2A 和 和 IRES 连接的怎么做?

«  10 天前
创建了主题  › 荧光强弱跟什么有关?

荧光强弱跟什么有关?为什么我的荧光很弱有什么原因吗

«  10 天前
创建了主题  › 敲除株筛选是不是直接通过抗性筛选就可以了?

敲除株筛选是不是直接通过抗性筛选就可以了?

«  10 天前
回复了主题  › 病毒感染细胞后,在倒置荧光显微镜下能否观察到绿色荧光?

如果载体带有zsgreen,就可以表达绿色荧光蛋白,这样可以在荧光显微镜下看绿色荧光。但是这个只能是观察是否感染上,就是看的是感染效率而非表达效率;如果看表达效率,需要做相应基因的QPCR和WB的。


«  16 天前
回复了主题  › 为什么做 miR 过表达一般只做前体?干扰只做成熟体?

miR理论上一般5p和3p两种成熟体形式都有,主要以一种成熟体稳定存在。hsa-mir-30a的5p是稳定的,3p

«  16 天前
回复了主题  › 双荧光素酶实验为什么只验证结合还做突变体?

因为miR和靶基因验证的方式主要通过miR的种子区域(2-8 位)去验证结合,但是也有文献验证非种子区域结合的,这种结合还是有可能的,所以突变种子区域结合位点进一步确认,这种验证方式更被认可,去除了其他因素的影响

«  16 天前
回复了主题  › 为什么做 sponge 不建议直接检测 miR,而是直接检测下游靶基因?

1)sponge是miR的重复反义序列,他是吸附在miR上导致miR发挥作用的数量减少,并非改变miR

«  16 天前
创建了主题  › Cas9敲除编码基因和非编码基因的区别

 Cas9敲除编码基因和非编码基因的区别

«  24 天前
创建了主题  › 做microRNA干扰病毒,有哪两种方式,那种好用?

做microRNA干扰病毒,有哪两种方式,那种好用?

«  24 天前
创建了主题  › 有客户在做荧光素酶的时候,已经做过小鼠的miRNA与靶基因的关系了,做人的该基因与miRNA还需要去预测验证吗?

有客户在做荧光素酶的时候,已经做过小鼠的miRNA与靶基因的关系了,做人的该基因与miRNA还需要去预测验证吗?

«  24 天前
创建了主题  › 实验中慢病毒感染效率不高的情况,要怎么解决?

实验中慢病毒感染效率不高的情况,要怎么解决?

«  24 天前
回复了主题  › 载体加flag标签的目的是什么?

蛋白标签(protein tag)是指利用DNA体外重组技术,与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白质,以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和纯化等,我们公司载体上常用的标签是 Flag,方便在 WB

«  2023-08-29
回复了主题  › siRNA和ASO干扰区别是什么?

ASO和siRNA均是RNA干扰技术,是沉默lncRNA手段。因为不同lncRNA在细胞中定位不同,所以两者的干扰效率不同,这就要求针对不同的lncRNA,慎重选择

«  2023-08-29
回复了主题  › dCas9区别于Cas9的功能是什么?

Cas9的核酸酶剪切活性取决于两个结构域:RuvC和HNH。这两个结构域分别负责切割DNA 链的两条链,并且这两个结构域能够单独地被人工点突变失活。两种突变体的Cas9仍然具有核酸酶活性,可对靶向序列进行剪切作用。当

«  2023-08-29
回复了主题  › AAV 辅助质粒的作用是什么?

pAAV-RC:Rep在病毒复制、基因表达调控及宿主染色体定点整合、病毒包装中起重要作用。Cap通过不同的翻译起始子编码生成包装病毒的外壳。不同血清型的主要区别在于衣壳蛋白 Cap的不同,并决定各种血清型AAV

«  2023-08-29
创建了主题  › 为什么 RNAi 应用于 lncRNA 的效果不理想?

为什么 RNAi 应用于 lncRNA 的效果不理想?

«  2023-08-21
创建了主题  › 能列举下常用蛋白标签有那些以及他们的用途吗,用这些标签会不会增加蛋白的相对分子量?

能列举下常用蛋白标签有那些以及他们的用途吗,用这些标签会不会增加蛋白的相对分子量?

«  2023-08-21
创建了主题  › 为什么我做实验用腺相关病毒( aav) 体外感染效率很低 (AAV 在细胞上的表达远比不上在动物体内的表达)?

为什么我做实验用腺相关病毒( aav) 体外感染效率很低 (AAV 在细胞上的表达远比不上在动物体内的表达)?

«  2023-08-21
创建了主题  › 想咨询一下,你们公司小鼠逆转录病毒转染CD4 T细胞的推荐MOI是多少呀,因为试用装的体积太少,我们不够试很多梯度,能否给个参考MOI值,我们好设的窄一点,节约病毒

想咨询一下,你们公司小鼠逆转录病毒转染CD4 T细胞的推荐MOI是多少呀,因为试用装的体积太少,我们不够试很多梯度,能否给个参考MOI值,我们好设的窄一点,节约病毒

«  2023-08-21
回复了主题  › 应该在 sgRNA 中包含 PAM 序列吗?

PAM序列不应作为sgRNA的一部分。

«  2023-08-15
回复了主题  › AAV 注射一次在多长时间内都有敲低/过表达的效果?

AAV一般是可以维持3个月到半年,在这个时间内理论上

«  2023-08-15
回复了主题  › siRNA能用来注射动物吗?

可以,要选择化学修饰的siRNA,恰当的修饰能够增加siRNA 的体内稳定性(抵抗核酸酶降解),和对组织的亲和力。

«  2023-08-15
回复了主题  › Mimics、inhibitor 跟 agomir、antagomir 区别?

Mimics(双链):模拟生物体内源的miRNAs,

«  2023-08-15
回复了主题  › 构建的慢病毒没有带荧光,有什么可以简单判断感染效率的办法吗?

最简单的是可以通过puro筛选检测:于感染后72小时加入工作浓度的嘌呤霉素,培养2-3天,镜下观察,选取细胞存活率较高且细胞状态较好的组,对应为较适宜的MOI值。另外,还可以通过目的基因的qPCR、WB、免疫荧光、免疫组化等方法摸索最佳MOI。

«  2023-05-29
回复了主题  › 有没有大佬可以给我讲讲细胞黑胶虫和支原体的区别,细胞老是养不好!!!

支原体:高倍镜下见小黑点,对PH 值影响较大,细胞换液后很快培养基变黄,换液后有一定改善但是培养后继续增多,可以pcr检测鉴定
黑胶虫:高倍镜下见小黑点,做布朗运动,换液不会改善

«  2023-05-29