做细胞永生化推荐什么病毒？

启动子活性验证，必须要过表达一个转录因子么？

腺相关病毒（AAV） 注射一次在多长时间内都有敲低/过表达的效果？

慢病毒如何整合到基因组？

慢病毒（lentivirus）感染细胞荧光表达较弱？我应该怎么办

慢病毒感染效率低怎么办，如何提高慢病毒感染效率？

慢病毒感染后细胞状态异常的原因有什么？

用于慢病毒感染的细胞接种量多少才合适呢？

WB 蛋白条带大小与理论值不符，可能是什么原因？

荧光素酶和荧光蛋白的检测仪器相同吗？是一种东西吗？fluc是哪一种？

介绍下什么是DIO系统，是怎么运作的，原理是什么？

活体成像推荐什么病毒，腺相关病毒（AAV）可以吗？有什么荧光蛋白能使用？我看有用荧光素酶（luc）和荧光蛋白的比如EGFP、zsGREEN

AAV-BBB的血清型能透过血脑屏障感染大脑的，AAV的其他血清是不具备这个特性，用AAV-BBB携带shRNA尾静脉注射即可

稳转株都是用什么病毒做的？一般稳定株怎么筛选？

Cas9 的核酸酶剪切活性取决于两个结构域：RuvC 和 HNH。这两个结构域分别负责切割
DNA 链的两条链，并且这两个结构域能够单独地被人工点突变失活。两种突变体的 Cas9 仍
然具有核酸酶活性，可对靶向序列进行剪切作用。当 RuvC 和 HNH 同时处于失活状态时，Cas9将不具有核酸酶活性，成为 dCas9(dead Cas9)。dCas9 虽然没有剪切 DNA 的能力，但仍然可以保留由 gRNA&nbs

pAAV-RC：Rep在病毒复制、基因表达调控及宿主染色体定点整合、病毒包装中起重要
作用。Cap通过不同的翻译起始子编码生成包装病毒的外壳。不同血清型的主要区别在于衣
壳蛋白Cap 的不同，并决定各种血清型 AAV 对不同组织和细胞有不同的感染效率。应用 AAV2的 ITR 以及全部或部分 AAV2 的 rep 蛋白，换上其他血清型 AAV 的 cap 蛋白，可以得到具有各血清型感染特征的杂合 AAV 载体。

不同AAV血清型具有不同的衣壳蛋白空间结构、序列和组织特异性，因而其识别与结合的细胞表面受体也相应有很大差别，这也导致不同血清型转染的细胞类型和感染效率也各不相同。
启动子是RNA聚合酶识别、结合和开始转录的一段DNA序列，它含有聚合酶特异结合和转录起始所需的保守序列，但是它本身并不会被转录。启动子不同的结构会导致与RNA聚合酶的亲和能力有所差异，从而会导致基因的表达水平的不同，组织特异性的启动子又叫器官特异性启动子，可以让某个基因特异的表达在某种组织或者器官中，与感染效率是没有关系的。
所以将上述两个方面结合起来，首先有一个对组织的相对特异性感染，再加上特异性启动子在组

细胞碎片：镜下见黑色杂质，大小不均，换液后不见，可能是细胞状态不好（比如原代细胞传代次数过多，新复苏的细胞复苏操作过程不适，冻存条件对细胞损伤大，病毒感染MOI值过大，细胞损伤较重，培养基条件不适，血清比例需要调整等。）。     
细菌污染：细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状，根据感染细菌的不同，可有不同的外形，培养液一般会浑浊变黄，对细胞生长影响明显。对培养环境消毒，加抗生素。
霉菌污染：培养液是清亮的，倒置显微镜下无杂质，37度孵箱培养2-3天，仍清亮，但出现絮状杂质，镜下可见呈细丝状的团状漂浮物，可看到明显的菌丝，

想敲除lncRNA，这个gRNA设计上有什么不同吗？

RNAi干扰，mRNA变化明显但是wb没变化，什么原因？

活体成像的注射方式有哪些，一般是怎么选择底物的？

做活体成像推荐什么病毒

验证目的基因的干扰效率一般是用qPCR的方法，但也可以用双荧光酶素报告基因系统来做的，与验证mir与靶基因结合原理一致，把目的基因当成

都是作为载体，将目的序列递送到靶细胞内部。 进入细胞方式不一样：质粒通过转染进入目的细胞，病毒通过感染进入目的细胞，特异性更强，且效率更高； 所搭载的序列形式及其发挥功能的方式可能不一样：质粒

都是作为载体，将目的序列递送到靶细胞内部。 进入细胞方式不一样：质粒通过转染进入目的细胞，病毒通过感染进入目的细胞，特异性更强，且效率更高； 所搭载的序列形式及其发挥功能的方式可能不一样：质粒

将病毒与293 细胞共