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减肥呀减肥呀

用户名:减肥呀减肥呀

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最后活动于2 å¤©å‰
回复了主题  â€º è¿›è¡Œç›®çš„序列测序的时候为什么不用PCR产物直接测序而是连到载体后转入大肠杆菌后进行测序? 

因为前面的几十个碱基是无法识别的杂峰,最后几百个碱基也是无法识别的杂峰,我们无法知道这部分序列的真实数据。将目的片段放到载体上,使用载体引物(距插入基因100bp左右)测序,可获得完整准确的基因序列。此外,

«  2 å¤©å‰
回复了主题  â€º TA克隆(TA cloning)的优点和缺点有哪些?

优点:

1.简单易行:TA

«  2 å¤©å‰
回复了主题  â€º è¯·é—®ä»€ä¹ˆæ˜¯TA克隆(TA cloning)?

TA克隆技术(TA cloning)利用Taq

«  2 å¤©å‰
创建了主题  â€º ä¸ºä»€ä¹ˆè¡¨è¾¾çš„荧光蛋白亮度较低?

为什么我做的实验和文献的情况不一样,荧光蛋白的亮度很低

«  2024-01-12
创建了主题  â€º ä¸åŒè§å…‰å¦‚何选择

  ä¸åŒè§å…‰å¦‚何选择

«  2024-01-12
创建了主题  â€º è›‹ç™½èžåˆè§å…‰è›‹ç™½åº”该注意那些?

蛋白融合荧光蛋白应该注意那些?

«  2024-01-12
创建了主题  â€º siRNA能用荧光标记看不到荧光

siRNA能用荧光标记看不到荧光

«  2024-01-12
创建了主题  â€º è…ºç›¸å…³ç—…毒感染后治疗措施

腺相关病毒感染后治疗措施

«  2023-12-21
创建了主题  â€º è…ºç›¸å…³ç—…毒发生溅潵后应急措施

腺相关病毒发生溅潵后应急措施

«  2023-12-21
创建了主题  â€º æ„ŸæŸ“腺病毒后治疗措施

感染腺病毒后治疗措施

«  2023-12-21
创建了主题  â€º è…ºç—…毒发生溅潵后应急措施

腺病毒发生溅潵后应急措施

«  2023-12-21
创建了主题  â€º å¦‚果慢病毒发生感染后治疗措施有那些

如果慢病毒发生感染后治疗措施有那些

«  2023-11-29
创建了主题  â€º æ…¢ç—…毒发生溅潵后应急措施

慢病毒发生溅潵后应急措施

«  2023-11-29
创建了主题  â€º æ…¢ç—…毒操作中注意的那些

慢病毒操作中注意事项

«  2023-11-29
创建了主题  â€º æ…¢ç—…毒生物安全等级是多少

慢病毒生物安全等级是多少

«  2023-11-29
回复了主题  â€º ä¸ºä»€ä¹ˆçº¿ç²’体自噬keima病毒感染细胞后,蓝色滤光片和绿光滤光片两个通道看到的都是红光?

Keima来源于珊瑚虫,是一种发射峰为620nm的荧光蛋白,具有PH值依赖性的双峰激发光谱,在中性和酸性环境中分别于440nm和550nm处被激发,因此,随着时间的推移,递送到溶酶体的keima量可以通过在550nm处激发的信号强度和在440nm处激发的信号强度的比值来估计。蓝色滤光片和绿光滤光片两个通道都

«  2023-11-22
回复了主题  â€º ä¸åŒç§å±žé—´çš„基因过表达与干扰是否可以通用?

这种情况首先需要比对两个物种的基因核苷酸序列以及碱基序列,如果一致,则过表达与干

扰都可以通用;但如果碱基序列不一致,但同源性极高,就可以比对一下蛋白序列。如果蛋

«  2023-11-22
回复了主题  â€º pSI-Check2和pmirGLO有什么区别?

(1)这两个载体的元件大致相同,对于miRNA和靶基因相关的荧光素酶实验来说没什么

«  2023-11-22
回复了主题  â€º miRNA sponge做miRNA干扰有哪些优势?

miRNA sponge可以吸附众多miRNA的分子,典型结构是包含

«  2023-11-22
创建了主题  â€º èƒ½é’ˆå¯¹æŸä¸€åŸºå› çš„特定结构域做敲低或敲除而不影响其他结构域的表达并发 挥功能吗?

 èƒ½é’ˆå¯¹æŸä¸€åŸºå› çš„特定结构域做敲低或敲除而不影响其他结构域的表达并发
挥功能吗?

«  2023-11-08
创建了主题  â€º è…ºç—…毒感染 离体 细胞后多久到表达高峰? 腺病毒用于动物在体实验可以维 ? 持多长时间? 腺病毒可以用于什么样的动物实验?

腺病毒感染 ç¦»ä½“ ç»†èƒžåŽå¤šä¹…到表达高峰? è…ºç—…毒用于动物在体实验可以维
? æŒå¤šé•¿æ—¶é—´ï¼Ÿ è…ºç—…毒可以用于什么样的动物实验?

«  2023-11-08
创建了主题  â€º äººåŽŸä»£ T细胞 、 鼠原代 T 细胞 、 Jurkat 细胞 ( 悬浮细胞 ) 分别推荐用什么病 毒来感染?

人原代 T 细胞 ã€ é¼ åŽŸä»£ T ç»†èƒž ã€ Jurkat ç»†èƒž ï¼ˆ æ‚¬æµ®ç»†èƒž ï¼‰ åˆ†åˆ«æŽ¨èç”¨ä»€ä¹ˆç—…
毒来感染?

«  2023-11-08
创建了主题  â€º æ…¢ç—…毒载体转染时荧光很亮 , 但是包装成病毒并感染目的细胞后 , 荧光弱或 者根本不亮,是什么原因?是目的基因未表达吗?

慢病毒载体转染时荧光很亮 ï¼Œ ä½†æ˜¯åŒ…装成病毒并感染目的细胞后 ï¼Œ è§å…‰å¼±æˆ–
者根本不亮,是什么原因?是目的基因未表达吗?

«  2023-11-08
回复了主题  â€º siRNA下调效果很好,但是包装成shRNA病毒后,下调效果变差?

siRNA和shRNA在结构上是不一样的,siRNA为化学合成,使用浓度一般为5μM,浓度较高, 
瞬时转染时如细胞转染效率尚可,瞬时进入细胞中的分子数超过108,且不需要经过剪切加工就 å¯å’Œé¶ç‚¹ç»“合,干扰效率高。 
shRNA则是将干扰基因克隆到DNA上,经过病毒整合(慢病毒)或非整合(腺病毒,腺相 
关病毒)进入到细胞后,转录形成发夹RNA,再经过一系列酶的剪切加工,才形成可以和靶点结 åˆçš„干扰RNA。这个过程中因为拷贝数低(如慢病毒需要整合基因组),转录加工过程复杂,会 å¯¼è‡´å¹²æ‰°æ•ˆæžœä¸ç†æƒ³ã€‚

«  2023-11-01
回复了主题  â€º å»ºè®®ç”¨293的哪几个分支细胞来扩增腺病毒毒种呢

用293A细胞,293A细胞是293来源的细胞,含有腺病毒E1早期基因,而我们使用的腺病毒载体为了提供克隆的空间,即装载外源基因空间,缺失了E1的早期区,因此当我们转然E1缺失的病毒载体到293A时,由于293A能提供E1早期蛋白,才能形成有感染力的腺病毒颗粒。

«  2023-11-01
回复了主题  â€º æž„建载体时如何选择启动子

1、首先确定实验对象是细菌、动物还是植物。
2、(下面以哺乳动物为例)
3、确认是做动物实验还是细胞实验。
4、如果是做细胞实验,需要先确定是过表达目的基因还是干扰目的基因,如果是过表达则可以选择CMV、EF1a等二型启动子;如果是干扰则可以选择U6、H1等三型启动子。这里需要特别注意的是三型启动子不能启动含有连续四个T的干扰序列,如果干扰序列中含有连续的四个T,那么则需要更换启动子为二型启动子,干扰序列采用mir-30结构。
5、如果是做动物实验,则需要确定是否需要特异性表达,以此来确定是否需要选择特异性启动子。无论是过表达目的基因还是干扰目的基因都可以

«  2023-11-01
回复了主题  â€º CMV、EF1α、CAG启动子有什么区别

1、CMV启动子作为最为广泛使用的启动子,适合在肿瘤细胞、肌肉、肝脏等体细胞或者贴壁细胞的表达,不适合大多数干细胞、悬浮细胞及原代细胞的表达;

2、EF1α启动子适合干细胞、原代细胞、造血细胞等的表达,在常用细胞如HEK293、肿瘤等细胞系中弱于CMV;

3、CAG启动子在不少细胞系,诸如免疫细胞、体细胞,有不次于CMV的表达效率,也是基因表达的一个较优选择的启动子。

«  2023-11-01
创建了主题  â€º å¸‚面上 LV、AD、AAV这三种病毒 常见的包装体系分别是什么?

市面上 LV、AD、AAV这三种病毒 å¸¸è§çš„包装体系分别是什么?

«  2023-10-25
创建了主题  â€º Flag/6His/Myc 等蛋白标签一般带在蛋白的 N 端还是 C 端?

Flag/6His/Myc 等蛋白标签一般带在蛋白的 N 端还是 C 端?

«  2023-10-25