为什么我包装出来的慢病毒的滴度次次都不一样?
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2024-06-20 •
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最后更新于 2024-06-20
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慢病毒滴度是用于评估转导一定数量靶细胞所需要的病毒数量。
影响慢病毒滴度的决定因素主要有:1.包装细胞,293T细胞作为常用的包装宿主,其健康状态是影响病毒产量的关键因素,用于慢病毒包装的293T细胞的传代数不宜过高,建议使用30代以内的293T细胞;2.转染效率,选择优化后的转染体系和专用转染试剂提高转染效率;3.插入基因片段大小,慢病毒载体容纳外源基因长度的能力有限,超过3kb就会导致包装效率大大降低,而整个质粒过大,也会导致转染效率降低,进而影响最终的滴度;4.收病毒的时机,转染后的第24 h~48 h是慢病毒的生产高峰,可收获第一批慢病毒,在48 h~72 h,滴度下降,可使用小体积培养基收获1~2次慢病毒,并和第一次收获的慢病毒合并,如果单纯追求高滴度,收获一次即可,大多数时候第一次收获的慢病毒即可满足多次实验需求。