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最后活动于16 小时前
创建了主题  › 为什么我包装出来的慢病毒的滴度次次都不一样?

为什么我包装出来的慢病毒的滴度次次都不一样?

«  16 小时前
创建了主题  › 用siRNA做基因干扰,为什么要强调mRNA水平检测?可以直接检测蛋白和功能吗?

用siRNA做基因干扰,为什么要强调mRNA水平检测?可以直接检测蛋白和功能吗?

«  16 小时前
创建了主题  › 我想构建稳转株,但是听说有单克隆细胞株和多克隆细胞系,这两个有什么区别?

我想构建稳转株,但是听说有单克隆细胞株和多克隆细胞系,这两个有什么区别?

«  16 小时前
创建了主题  › 冻存后的细胞复苏了,但是为什么一直不贴壁?要怎么解决?

冻存后的细胞复苏了,但是为什么一直不贴壁?要怎么解决?

«  16 小时前
回复了主题  › 基因干扰用的siRNA,miRNA过表达合成的mimics和miRNA干扰用的inhibitor分别是什么形式的小分子呀?

化学合成的siRNA 是双链小分子RNA;mimics也是双链小分子RNA;inhibitor是单链小分子RNA。一般我们在公司订购合成后,拿到的是干粉形式,常温运输,收到后我们先进行瞬时离心(如:速率1000rpm)沉淀下来干粉再使用无RNA酶的水进行溶解,溶解后可根据使用量分装,-20℃保存。

«  14 天前
回复了主题  › 我最近做了我的目的基因的干扰(knockdown,KD),qpcr检测发现敲低效果非常好,但为啥WB检测蛋白变化不明显呢?

根据我的经验来说,我觉得有以下几个原因可参考:
①有些蛋白半衰期长,即使干扰也不一定能被很快降低,可以检测不同时间的比较看看;
②部分蛋白在胞内的翻译有一定效率,干扰降低mRNA,细胞可能进一步提高翻译的效率,导致蛋白受到的影响没有mRNA那么直接;
③蛋白在胞内有一定的代谢率,且是可变的,当表达减少,胞内蛋白降解效率也可能反向调节。

«  14 天前
回复了主题  › 我用腺病毒(adenovirus,Ad)mt-keima工具监测线粒体自噬情况,我可以对细胞固定后进行成像吗?还是说必须要活细胞成像呢?

用mt-keima腺病毒感染细胞后观察线粒体自噬,这个建议直接将细胞铺到玻底/共聚焦培养皿中,后续成像需要在活细胞中进行,mt-keima不适合固定的细胞样品,因为固定会破坏溶酶体膜上的pH梯度而影响我们对自噬情况的观察的!

«  14 天前
回复了主题  › 我做慢病毒(lentivirus,LV)/腺病毒(adenovirus,Ad)感染细胞,感染结束后进行换液,那换液后需要PBS 清洗(wash)下吗?

换液后直接加入新鲜完全培养基即可,不需要用PBS wash细胞。

«  14 天前
创建了主题  › 我想通过荧光共振能量转移技术(FRET)验证两个蛋白的互作关系,这两种荧光该怎么选择?

我想通过荧光共振能量转移技术(FRET)验证两个蛋白的互作关系,这两种荧光该怎么选择?

«  2024-05-08
创建了主题  › 我转染了带荧光标记的siRNA,为什么对照组和实验组的siRNA在荧光显微镜下都看不到光?

我转染了带荧光标记的siRNA,为什么对照组和实验组的siRNA在荧光显微镜下都看不到光?

«  2024-05-08
创建了主题  › 我想过表达SELENOP这个基因,但是为什么从NCBI下载的CDS序列中间有很多终止密码子,这还能正常表达这个蛋白吗?

我想过表达SELENOP这个基因,但是为什么从NCBI下载的CDS序列中间有很多终止密码子,这还能正常表达这个蛋白吗?

«  2024-05-08
创建了主题  › 我有一个验证过的有编辑效率的gRNA,之前一直在细胞上做实验的,效果很好,现在想把这个gRNA包成AAV,注射Cas9基因小鼠可以吗?

我有一个验证过的有编辑效率的gRNA,之前一直在细胞上做实验的,效果很好,现在想把这个gRNA包成AAV,注射Cas9基因小鼠可以吗?

«  2024-05-08
回复了主题  › 有人知道pcdna3.1+/-质粒(plasmid)中的+、-是什么意思啊,有什么区别?

+  -的话,其实就是多克隆位点的顺序,可以结合质粒图谱看下,-的只不过是把+的多克隆位点反过来了~

«  2024-04-16
回复了主题  › 最近在做慢病毒(lentivirus,LV)转染,那转染后的细胞需要与其它普通细胞分开培养箱放吗?操作台需要分开吗?

不用和其它细胞分开培养箱放的;感染操作在安全柜进行即可,操作完后酒精喷下操作台擦拭干净即可。

«  2024-04-16
回复了主题  › 我做的基因过表达质粒(plasmid)转染,但是质粒不带荧光,我可以做免疫荧光看转染效率吗?

可以的,不过需要注意的是:染目的基因抗体的话,这个基因内源外源都表达,看不出来转染效率的;但是如果带标签的话可以染标签抗体,只看外源的,不过对照组就染不出来了因为对照组没有标签蛋白的表达。

«  2024-04-16
回复了主题  › 我的腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)的病毒液从-80℃冰箱拿出来管子上有挂壁,我可以离下心吗?

可以离心的,病毒液在冰上或者4℃化冻后,可以离心甩一下(离心不用太高速,就是低速甩下就好),然后用枪轻轻吹匀即可。

«  2024-04-16
创建了主题  › 为什么做质粒转染的时候建议用无血清、无双抗的培养基?

为什么做质粒转染的时候建议用无血清、无双抗的培养基?

«  2024-03-19
创建了主题  › 我想在你们这做一个基因敲除单克隆株,但是敲除之后细胞会不会不生长啊?

我想在你们这做一个基因敲除单克隆株,但是敲除之后细胞会不会不生长啊?

«  2024-03-19
创建了主题  › 我在构建质粒的时候看到有的同学把荧光和目的基因融合表达了,这么做有什么目的吗,我也需要这么构建吗?

我在构建质粒的时候看到有的同学把荧光和目的基因融合表达了,这么做有什么目的吗,我也需要这么构建吗?

«  2024-03-19
创建了主题  › 我想过表达一个基因,但是为什么NCBI上显示有好多isoform,还有很多transcript variant,这些是什么意思?我应该选哪个做实验呢?

我想过表达一个基因,但是为什么NCBI上显示有好多isoform,还有很多transcript variant,这些是什么意思?我应该选哪个做实验呢?

«  2024-03-19
回复了主题  › 我把-20℃冻存的质粒(plasmid)解冻后发现要5个小时之后才用,那我是要重新放回-20℃冻起来还是先放4℃暂时保存呀?

先放在4℃就可以啦,质粒是DNA,比较稳定的,要避免反复冻融。使用完之后可以放回-20℃,如果一管中质粒量很多,也可以再次分装之后于-20℃冻存。

«  2024-03-05
回复了主题  › 我用慢病毒(Lentivirus,Lv)感染细胞后,使用嘌呤霉素(puromycin)成功筛选好稳转株后,还需要继续加嘌呤霉素吗?

使用嘌呤霉素成功筛选好稳转株后,后续培养仍需要加嘌呤霉素给予细胞选择压力来维持培养(嘌呤霉素浓度可以减半),或者也可以每隔一代加一次嘌呤霉素。

«  2024-03-05
回复了主题  › 含质粒(plasmid)的菌液使用液体LB培养基进行扩增时,LB中所使用的氨苄青霉素Amp或卡那霉素Kana的工作浓度分别是多少呀?实验室配制的氨苄青霉素或卡那霉素的母液浓度一般是多少呢?

液体LB培养基中氨苄或卡那的常用工作浓度是50ug/ml。氨苄青霉素母液浓度一般配制为100mg/mL,卡那霉素母液浓度一般配制为50mg/mL。

«  2024-03-05
回复了主题  › 进行慢病毒(Lentivirus,Lv)感染,请问如何根据我目的细胞的MOI(Multiplicity of Infection,感染复数)来确定所需要的慢病毒病毒液体积呀?

MOI(Multiplicity of Infection,感染复数)是指每个细胞感染的病毒数,通常MOI越高,慢病毒整合到染色体的数量以及目的蛋白的表达量越高。
那么我们在对细胞进行慢病毒感染时,其所需要的病毒母液体积计算公式如下:
每孔加病毒量(uL)=[(MOI x 细胞数)/病毒滴度(TU/mL)] x 1000
也可以直接利用汉恒生物的病毒体积计算器计算更方便:关注“汉恒生物”公众号,下方“资源中心”-“病毒体积计算器”即可使用,或使用网址---https://support.hanbio.ne

«  2024-03-05
创建了主题  › 为什么在RNA的提取时。RNA总量会很低?

为什么在RNA的提取时。RNA总量会很低?

«  2024-01-23
创建了主题  › 为什么制SDS-PAGE胶的时候总是漏胶?

为什么制SDS-PAGE胶的时候总是漏胶?

«  2024-01-23
创建了主题  › Co-IP之后的Wb结果中,50kDa和25kDa那里总是有杂带怎么办?

Co-IP之后的Wb结果中,50kDa和25kDa那里总是有杂带怎么办?

«  2024-01-23
创建了主题  › 悬浮细胞怎么提高病毒感染效率?

悬浮细胞怎么提高病毒感染效率?

«  2024-01-23
回复了主题  › 腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)的包装容量有多大?

AAV的包装容量(两个ITR之间的片段大小)通常不能超过4.5Kb,除掉启动子、EGFP标记、转录终止信号polyA等元件之外,外源基因的容量能力一般在2kb以下。

«  2024-01-02
回复了主题  › 有没有什么办法可以提高腺病毒(adenovirus,Ad)对细胞的感染效率?

腺病毒对细胞的感染效率受多个因素影响,如病毒活性、细胞自身的状态、MOI值、感染时
间等。
 ① 病毒活性:解冻病毒一定要在冰上进行,尽量避免反复冻融;-80℃保存半年以上需要重新测滴度。
 ② 目的细胞:先进行预实验测试,看病毒载体是否合适感染目的细胞;对于悬浮细胞,可采用平角离心感染的方法;也可以减少病毒感染时的体积,从而提升感染的效率。
 ③ MOI值:进行MOI梯度摸索实验,找出最优的MOI浓度。
 ④ 感染时间,腺病毒一般在感染后8-16h换液,太早换液会导致

«  2024-01-02