不用和其它细胞分开培养箱放的；感染操作在安全柜进行即可，操作完后酒精喷下操作台擦拭干净即可。
可以的，不过需要注意的是：染目的基因抗体的话，这个基因内源外源都表达，看不出来转染效率的；但是如果带标签的话可以染标签抗体，只看外源的，不过对照组就染不出来了因为对照组没有标签蛋白的表达。
可以离心的，病毒液在冰上或者4℃化冻后，可以离心甩一下（离心不用太高速，就是低速甩下就好），然后用枪轻轻吹匀即可。
为什么做质粒转染的时候建议用无血清、无双抗的培养基？
我想在你们这做一个基因敲除单克隆株，但是敲除之后细胞会不会不生长啊？
我在构建质粒的时候看到有的同学把荧光和目的基因融合表达了，这么做有什么目的吗，我也需要这么构建吗？
我想过表达一个基因，但是为什么NCBI上显示有好多isoform，还有很多transcript variant，这些是什么意思？我应该选哪个做实验呢？
先放在4℃就可以啦，质粒是DNA，比较稳定的，要避免反复冻融。使用完之后可以放回-20℃，如果一管中质粒量很多，也可以再次分装之后于-20℃冻存。
使用嘌呤霉素成功筛选好稳转株后，后续培养仍需要加嘌呤霉素给予细胞选择压力来维持培养（嘌呤霉素浓度可以减半），或者也可以每隔一代加一次嘌呤霉素。
液体LB培养基中氨苄或卡那的常用工作浓度是50ug/ml。氨苄青霉素母液浓度一般配制为100mg/mL，卡那霉素母液浓度一般配制为50mg/mL。
MOI（Multiplicity of Infection，感染复数）是指每个细胞感染的病毒数，通常MOI越高，慢病毒整合到染色体的数量以及目的蛋白的表达量越高。
那么我们在对细胞进行慢病毒感染时，其所需要的病毒母液体积计算公式如下：
每孔加病毒量（uL）=[（MOI x 细胞数）/病毒滴度（TU/mL）] x 1000
也可以直接利用汉恒生物的病毒体积计算器计算更方便：关注“汉恒生物”公众号，下方“资源中心”-“病毒体积计算器”即可使用，或使用网址---https://support.hanbio.ne
为什么在RNA的提取时。RNA总量会很低?
为什么制SDS-PAGE胶的时候总是漏胶？
Co-IP之后的Wb结果中，50kDa和25kDa那里总是有杂带怎么办？
悬浮细胞怎么提高病毒感染效率？
AAV的包装容量（两个ITR之间的片段大小）通常不能超过4.5Kb，除掉启动子、EGFP标记、转录终止信号polyA等元件之外，外源基因的容量能力一般在2kb以下。
腺病毒对细胞的感染效率受多个因素影响，如病毒活性、细胞自身的状态、MOI值、感染时
间等。
① 病毒活性：解冻病毒一定要在冰上进行，尽量避免反复冻融；-80℃保存半年以上需要重新测滴度。
② 目的细胞：先进行预实验测试，看病毒载体是否合适感染目的细胞；对于悬浮细胞，可采用平角离心感染的方法；也可以减少病毒感染时的体积，从而提升感染的效率。
③ MOI值：进行MOI梯度摸索实验，找出最优的MOI浓度。
④ 感染时间，腺病毒一般在感染后8-16h换液，太早换液会导致
引物别设计在突变位点处，或者qpcr产物范围避开同义突变位点，一般对于qpcr检测没什么太大影响的。
circRNA是非编码蛋白，不产生蛋白质，不需要加蛋白标签（如flag，HA，His等）,蛋白标签是蛋白层面的，而非编码RNA不翻译表达蛋白；当然如果是研究circRNA编码翻译功能的话，一般是会加蛋白标签便于后续检测。
IP（inmun
我想干扰敲低一个miRNA，有什么方法吗？
转染siRNA之后没有干扰效率是怎么回事？
我把siRNA的浓度加大了为什么敲低效率反而降低了？
我觉得可能有以下几个原因：
①有些蛋白半衰期长，即使干扰也不一定能被很块降低；②部分蛋白在胞内的翻译有一定效率，干扰降低mRNA，细胞可能进一步提高翻译的效率，导致蛋白受的的影响没有mRNA那么直接；③蛋白在胞内有一定的代谢率，且是可变的，当表达减少，胞内蛋白降解效率也可能反向调节。
siRNA和shRNA在结构上是不一样的，siRNA是化学合成的，分子较小，转染效率可以的情况下，进入细胞的分子量特别多，且不需要经过剪切加工就可以和靶点结合，干扰效率高。
shRNA是将干扰片段克隆到DNA上，经过病毒整合（慢病毒）或非整合（腺病毒，腺相关病毒）进入到细胞后，转录形成发夹RNA，再经过一系列酶的剪切加工，才形成可以和靶点结合的干扰RNA。
这个过程中因为拷贝数低（如慢病毒需要整合基因组），转录加工过程复杂，会导致干扰效果可能不如siRNA理想。
一般可以考虑加个柔性Linker（GGGGS）n，让目的蛋白和荧光蛋白之间相对更独立。
慢病毒稳转株和正常细胞的复苏传代以及培养没什么区别，只是有抗性的话可以抗性浓度减半维持培养，或者每隔一代抗性筛选一次也行。
双荧光素酶实验中报告基因和内参基因质粒共转染的比例是怎样的？
带荧光标记的病毒做石蜡切片会显色吗？
+ -的话，其实就是多克隆位点的顺序，可以结合质粒图谱看下，-的只不过是把+的多克隆位点反过来了~