养的细胞长的很好,冻存后复苏细胞状态不好养不起来,是什么原因?

By 云梦 at 9 天前 • 0 人收藏 • 51 人看过


1 个回复 | 最后更新于 9 天前
9 天前   # 1

有可能是冻存细胞的环节出现了问题:当细胞冷到零度以下时,细胞器脱水,细胞中可溶性物质浓度升高,并在细胞内形成冰晶,冰晶的大小对细胞的影响是不同的,大冰晶容易造成细胞膜、细胞器的损伤和破裂,因此,会造成复苏出来的细胞存活率低、状态等与冻存前差异很大。我们在冻存细胞时需要有几点注意事项:

1)需冻存保种的细胞应生长状态良好且存活率高,其密度约在80%-90%,无污染。

2)冻存前注意切勿消化时间过长、吹打力度过重、离心转速过大或离心时间过长,以免造成细胞损伤。

3)细胞冻存原则为“慢冻”,因此,细胞加入冻存管后如何保存应严格遵守冻存流程,避免冻存太快,产生结晶。

4)程序降温盒和常规冻存液需室温备用,完全培养基、胰酶和PBS37℃预热。


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