dCas9有哪些应用?

By 云梦 at 2024-05-16 • 0 人收藏 • 103 人看过


1 个回复 | 最后更新于 2024-05-17
2024-05-17   # 1

Cas9的核酸酶剪切活性取决于两个结构域:RuvCHNH,它们分别负责切割DNA链的两条链,将这两个保守的核酸内切酶结构域进行突变,其中RuvC催化结构域的第10位天冬氨酸突变为丙氨酸(D10A)以及HNH催化结构域的第840位组氨酸突变为丙氨酸(H840A),Cas9蛋白将失去核酸内切酶活性,失去活性的Cas9称之为dead Cas9dCas9),dCas9虽然失去了切割DNA的能力,但仍然可以在gRNA的引导下与特定的DNA序列结合。

1CRISPR/dCas9基因激活系统:dCas9与转录调节因子VP64EDLL等的融合来实现对特定基因的激活。为了增强激活能力,科学家们在dCas9-VP64的基础结构上开发了第二代dCas9-SAMsynergistic activation mediatorSAM)系统,其中sgRNA经过修饰,可以募集额外的转录激活因子以达成协同激活作用。

2CRISPR/dCas9基因抑制系统:单独的dCas9与靶位点的结合在空间上可以干扰转录酶的结合,起到抑制靶基因转录的作用。

3)表观基因组编辑:dCas9与表观遗传修饰酶融合在一起,形成dCas9表观遗传编辑系统,通过核酸酶的靶向结合目标DNA的特性实现特定基因组位点上表观基因组的编辑。包括DNA甲基化修饰系统(dCas9-DNMT3a)、DNA去甲基化修饰(dCas9-TET1)、dCas9-p300(组蛋白乙酰化系统)、dCas9-LSD1(组蛋白去甲基化系统)。


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