从floxp小鼠分离出来的原代细胞,用携带Cre的腺病毒(Adenovirus,AdV)进行感染,但敲除结果非常不理想且不稳定,这种结果的可能原因和解决方案有哪些?

By 落落 at 2024-04-19 • 0 人收藏 • 507 人看过

从floxp小鼠分离出来的原代细胞,用携带Cre的腺病毒(Adenovirus,AdV)进行感染,但敲除结果非常不理想且不稳定,这种结果的可能原因和解决方案有哪些?

1 个回复 | 最后更新于 2024-04-19
2024-04-19   # 1

腺病毒属于瞬转,无法将携带的基因整合到宿主的染色体上进行稳定的表达。用腺病毒感染没办法到达100%的感染效率的话,敲除就会不彻底,且后续无法筛选,如果做长期实验,后面细胞的阴性细胞比例会越来越高。结果不稳定很有可能是感染效率不稳定导致的,AdV-Cre病毒的转染只能达到敲低的效果(有感染的阴性细胞),且维持的时间也有期限。如果想实现敲除维持长期效果,一是可以对成功敲除的细胞进行单克隆培养;二是可以试试转染带抗性基因的慢病毒(Lentivirus,LV),在感染之后进行筛选,让宿主细胞稳定表达Cre酶。不过分离的原代细胞一般无法一直传代,这两种方案的可行度也要综合分析。

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