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下一班

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最后活动于9 天前
«  9 天前
回复了主题  › 我给ac16人心肌细胞转了sirna,带cy3标签,我们这边有测定荧光吸光度的酶标仪,可以用来测定转染效率吗?

看酶标仪是否可激发光,以及波长是否涵盖在里,如果满足这两个条件,可以用来看转染效率

«  22 天前
回复了主题  › 我构建了一个miRNA过表达的慢病毒(lv,lentivirus),那之前检测细胞miRNA表达的时候逆转录用的茎环引物还可以用在用了慢病毒的细胞上吗?

可以用茎环法,用之前的反转录试剂盒和qpcr引物去做,只要检测的是相同的microRNA就不用换

«  22 天前
回复了主题  › 使用带荧光素酶luc标签的腺相关病毒AAV做动物实验,把动物处死了,取材还可以拍荧光吗?

不可以拍了,因为luc是酶,luc成像是一个酶促反应,需要底物。

«  22 天前
回复了主题  › 我想做基因敲除(ko,knocout),敲掉肺部巨噬细胞表面的ffar2,但我查了一下,这个蛋白是7次跨膜蛋白,会不会增加敲除难度啊?

这个敲除利用的是loxp/cre系统,主要是cre酶对DNA序列进行作用,不是对蛋白进行降解,对蛋白的结构应该没有什么要求。

«  22 天前
«  2023-02-24
回复了主题  › 使用了腺病毒注射小鼠,但是要6周后才能取样,有什么方法可以延长目的基因的表达时间?

可以多次注射ADV,一周注射一次,注射6周。

«  2023-02-17
回复了主题  › 细胞培养一段时间后,有的培养基颜色发生了变化,有点偏黄,有的培养基还是红色,是为什么?

培养基里的酚红是一种酸碱指示剂,细胞生长代谢产生的酸性物质使pH降低,培养基呈现偏黄的现象;如果细胞增殖代谢较慢,培养基会偏红一点

«  2023-02-17
回复了主题  › 我想用慢病毒做小鼠海马注射,多少量比较合适?多久看结果比较好?

2微升左右吧,慢病毒表达时间一般是一周,我看有很多人是4周采样的,他们应该是还想看些表型之类的。

«  2023-02-17
回复了主题  › 有基因鼠上用ALDH1I1启动子,是不是我也可以用这个启动子做载体包aav?

这个启动子一般用在基因鼠上,载体上暂时还没见过文献做载体包AAV。启动子放在载体上就需要考虑序列长度以及会不会表现出内源性启动子相似的性质,要不就先构建个2000bp打几只小鼠试试。

«  2023-02-17
回复了主题  › 想自己设计sgRNA,有什么需要注意的吗?

一般要注意以下5个方面:

1、评分:在线网站预测评分较高的

2、靶点序列:避免出现连续4个及以上的T;如果用U6或T7启动子驱动sgRNA的表达载体,需要考虑sgRNA的5'碱基是否为G或GG。

3、CG含量:一般在40%~60%之间较好。

4、靶点位置:需要设计在CDS区;要在独立外显子上,尽量靠近蛋白N段,一般是在编码区前1/3的位置;多个靶点之间序列不重叠,避免snp影响靶点有效性。

5、特异性:默认针对同源区设计,在基因组其他位置,至少出现错配3个碱基。

«  2023-02-09
回复了主题  › 稳转株筛完之后要不要加药继续维持呢?

可以用一半的浓度压力培养。

«  2023-02-09
回复了主题  › 做敲除发现基因只有一部分被敲除,想继续全部敲除怎么办?

有可能是gRNA的位置不够靠前,或者刚好敲的是3的整数倍导致后面的序列还是正常翻译,这时候可以再多设计几条gRNA试一下

«  2023-02-09
回复了主题  › 网站上预测miRNA跟靶基因的结果里有保守区结合和非保守区结合,这两个有什么区别呢?我做实验的时候应该选哪个比较好?

miRNA在不同物种间具有保守性。是根据miRNA来划分的。但是有时候跟靶基因配对的没保守性的seed match区域也能找到一些有功能的靶点,所有有的预测网站也可以提供一些算法预测非保守区。选哪个都可以,分数高可能性越大,但是所有预测的位点都不能确定一定结合的。

«  2023-02-09