敲除大单克隆株是不是直接通过抗性筛选就可以了?

By 减肥呀减肥呀 at 2024-03-14 • 0 人收藏 • 81 人看过

敲除单克隆株是不是直接通过抗性筛选就可以了?


1 个回复 | 最后更新于 2024-03-14
2024-03-14   # 1

不是的,通过抗性筛选可以将为转染成功的细胞杀死,留下的都是转染成功的细胞。但转染成功的细胞并不意味着敲除成功,Cas9 对靶基因的编辑会导致indel(基因序列发生的插入或缺失改变)Indel 又有 3 倍数碱基和非 3 倍数的,前者造成的结果是氨基酸的插入或缺失,这种情况编辑位点前后的氨基酸序列不变,不认为是一个成功的敲除。后者造成移码突变,编辑位点后的氨基酸序列发生紊乱,这种是成功的敲除在混合细胞中这几种情况同时存在。所以我们需要进行单克隆筛选,通过有限稀释,挑单克隆进行测序,根据测序结果来判断是否成功敲除。


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