质粒转化感受态后长不出克隆或数量很少,是什么原因?

By 梧桐树下 at 2024-03-08 • 0 人收藏 • 189 人看过


1 个回复 | 最后更新于 2024-03-08
2024-03-08   # 1

这类情况可能是以下原因导致的:① 感受态转化效率低,需更换新的感受态;② 使用的抗生素种类与质粒的抗性不一致;③ 连接步骤中目的片段与载体的比例失衡;④ 插入片段体系中含有金属络合剂等杂质,使连接酶失活而导致构建失败,注意纯化目的片段PCR产物即可;⑤ 转化过程中加入了过多的质粒,导致转化效率降低,质粒体积不应超过感受态细胞体积的1/10。


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