不同荧光如何选择

By 减肥呀减肥呀 at 2024-01-12 • 0 人收藏 • 245 人看过

  不同荧光如何选择

1 个回复 | 最后更新于 2024-01-12
2024-01-12   # 1

激发波长/发射波长:对于单色实验,绿色荧光蛋白是最常用的,选择两种或以上荧光蛋白
进行多色成像时,建议激发和峰值发射波长均相隔 50-60nm 以上。荧光蛋白应用于活体成像实验时,尽量选择红色或近红外的荧光蛋白,这类荧光蛋白的发射波长较长,具有更好的
组织穿透能力。单体性质:将荧光蛋白与目标蛋白进行融合表达,直接地追踪目标蛋白或是定位目标蛋白,
多聚体可能会影响融合蛋白的生物学功能或定位,应尽量选择单体。
PK 值:每个荧光蛋白都有其最合适的 pH 值。大多数细胞器内及细胞质的 pH 值都在 7.0 左
右,然而溶酶体内的 pH 值就比较低,mCherry 的 PK 值比较低,可以用于标记溶酶体内的蛋
白。
亮度:荧光蛋白的亮度值由消光系数与量子产率的乘积计算得出,不同荧光蛋白亮度不同。
光稳定性:既我们常说的容不容易淬灭。在普通的荧光成像中,对荧光蛋白的光稳定性要求
并不是很高,比如激光共聚焦显微镜成像时,荧光信号的稳定性只需要能保证采集的完整的
一张图即可。而在超分辨荧光成像中,对荧光蛋白的光稳定性要求比较高。
成熟时间:荧光蛋白在发光之前需要经历转录、翻译、折叠等步骤,其中折叠过程占据了大
部分时间。

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