蛋白融合荧光蛋白应该注意那些?

By 减肥呀减肥呀 at 2024-01-12 • 0 人收藏 • 144 人看过

蛋白融合荧光蛋白应该注意那些?

1 个回复 | 最后更新于 2024-01-12
2024-01-12   # 1

需要考虑融合在 N 端或者 C 端,有的蛋白 N 端有信号肽(在蛋白转运后信号肽将被切除)、
N 端有甲硫氨酸切除,这类蛋白我们一般将标签构建在 C 端,或者构建在 N 端信号肽之后。
有的蛋白 C 端有折叠、活化时 C 端前肽被切除等,这类蛋白我们一般将标签构建在 N 端。
信号肽(signal peptide):信号肽存在于靶向内质网的蛋白质中,最终蛋白可能是分泌型/
细胞外型/周质型/等,一般在 N 端。
前导肽(leader peptide),转运肽(transitpeptide):前导肽一般引导蛋白穿膜,并且在后
来被剪切掉;转运肽将蛋白运送至线粒体,随后被剪切掉,一般在 N 端。
首位移除甲硫氨酸:蛋白质成熟时首位甲硫氨酸被切割掉,一般在 N 端。
前肽(propeptide):在成熟或活化过程中被裂解的蛋白质的一部分,可能在 C 端也可能在
N 端,一般存在于各类需要活化的蛋白中
建议在构建时在目的基因和荧光蛋白中间添加连接肽 linker,部分融合荧光蛋白可能出现
融合后荧光极弱甚至没有荧光的情况,这可能是融合蛋白内部相互作用影响了荧光蛋白的正
确构象。

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