做miRNA干扰时，用qPCR检测不到miRNA表达下调是什么原因？

miRNA干扰则基本上不适合用qPCR检测敲低水平，它本质上都是用成熟体的反义序列对其进行结合，进而阻断miRNA与靶基因结合。总的来说，检测不到miRNA水平下降是因为并没有被降解，只是位点被反义链封闭，使其功能受到了抑制。所以即使检测不到下调，也不能代表没有抑制，可以通过检测其靶基因的表达变化来验证。那么miRNA与反义链形成双链RNA没有被降解的原因主要为：

（1）反义RNA与miRNA结合后，序列很短，导致细胞内负责降解双链RNA的Dicer酶不能有效结合，而无法降解。

（2）miRNA以RISC复合物的形式存在，该复合物也会使Dicer酶无法高效结合。

（3）miRNA海绵属于不完全互补的反义RNA重复，也可以防止被降解。