慢病毒(lentivirus)感染细胞荧光表达较弱?我应该怎么办
荧光蛋白的亮度与启动子、表达方式和连接原件等有关:
1)不同启动子诱导荧光蛋白表达的强弱不同,如 UBC 相对于 EF1α、CAG、CMV 等强启动子表达较弱;
2)融合或非融合表达与荧光强度也有很大关系,融合表达时荧光蛋白可能出现错误折叠等现象,导致检测不到荧光信号或荧光较弱;非融合表达时一般选择连接肽作为连接原件,如 2A 肽或 IRES 将 ORF 分隔开;
3)带荧光的慢病毒感染细胞后,荧光的强度取决于病毒进入到细胞的颗粒数、细胞状态、细胞类型、观察时间等因素,荧光表达的强度与目的细胞感染病毒的颗粒数正相关,一般感染细胞后72h 观察荧光强度最佳,而增殖较慢的细胞可以适当延长时间;
4)也可能会遇到过表达的慢病毒比对照的荧光要暗的情况,这主要是因为基因的插入,会影响位于下游的荧光蛋白表达。
登录后方可回帖
忘记密码
在线咨询
产品试用
联系我们
返回顶部
小恒学术问答 Powered By © 2006-2022 汉恒生物 All Rights 论坛统计沪ICP备12028140号-8 Processed in 12.193 ms, 4 SQL Query(s), 829.93 KiB Memory Usage
荧光蛋白的亮度与启动子、表达方式和连接原件等有关:
1)不同启动子诱导荧光蛋白表达的强弱不同,如 UBC 相对于 EF1α、CAG、CMV 等强启动子表达较弱;
2)融合或非融合表达与荧光强度也有很大关系,融合表达时荧光蛋白可能出现错误折叠等现象,导致检测不到荧光信号或荧光较弱;非融合表达时一般选择连接肽作为连接原件,如 2A 肽或 IRES 将 ORF 分隔开;
3)带荧光的慢病毒感染细胞后,荧光的强度取决于病毒进入到细胞的颗粒数、细胞状态、细胞类型、观察时间等因素,荧光表达的强度与目的细胞感染病毒的颗粒数正相关,一般感染细胞后72h 观察荧光强度最佳,而增殖较慢的细胞可以适当延长时间;
4)也可能会遇到过表达的慢病毒比对照的荧光要暗的情况,这主要是因为基因的插入,会影响位于下游的荧光蛋白表达。