RNAi干扰,mRNA变化明显但是wb没变化,什么原因?
答:蛋白本身可能受多因素调控,RNAi是针对转录水平的调控,到蛋白多一步翻译,某些情况下不能保证mRNA完全与蛋白水平一致。(1)该蛋白的半衰期比较长,导致在检测时,之前表达的蛋白还未降解,确定半衰期需要用测定半衰期的方法检测,具体是用一些蛋白合成抑制剂处理后,隔一定时间检测该蛋白的水平;这种情况可以建议客户多隔一段时间再检测;(2)该蛋白有多种转录本,可能有不同isoform的蛋白,要确定下是不是这条siRNA是针对所有的转录本;(3)另外最后的可能就是该基因的翻译效率较高,较少mRNA仍能维持较高的蛋白水平。
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答:蛋白本身可能受多因素调控,RNAi是针对转录水平的调控,到蛋白多一步翻译,某些情况下不能保证mRNA完全与蛋白水平一致。
(1)该蛋白的半衰期比较长,导致在检测时,之前表达的蛋白还未降解,确定半衰期需要用测定半衰期的方法检测,具体是用一些蛋白合成抑制剂处理后,隔一定时间检测该蛋白的水平;这种情况可以建议客户多隔一段时间再检测;
(2)该蛋白有多种转录本,可能有不同isoform的蛋白,要确定下是不是这条siRNA是针对所有的转录本;
(3)另外最后的可能就是该基因的翻译效率较高,较少mRNA仍能维持较高的蛋白水平。