做干扰实验检测到目的基因的mRNA水平明显降低，但蛋白水平却没有检测到明显的变化，为什么会出现这种情况？

以下实验，构建稳定细胞株而不是瞬时转染更能满足实验要求
1)，外源片段在分裂细胞中长期(>2 周)稳定表达。虽然普通转染实验一般只能
保证 2-4 天的转染和表达效率，但腺病毒载体在多数分裂细胞中可以维持 2-4
周内的高转染效率和表达周期。而非分裂细胞，可以使用腺相关病毒载体转导外
源基因，因为腺相关病毒载体在许多非分裂细胞中可以保持长达 1 年的高效表
达。
2)，需要构建使用诱导表达系统，这主要是由于：
a)，过表达基因或者干扰目的基因引起细胞毒性或者抑制细胞生

其一观察未感染腺病毒时细胞的状态，细胞状态差或者细胞老化会影响后期感染腺病毒之后的细胞状态；其二 Adenovirus 可能对目的细胞有一定的毒性，需要降低感染时的病毒稀释度，并且在 4hrs，8hrs 或者 12hrs 后对细胞进行换液，用新鲜的完全培养液继续培养观察。

目的细胞中 GFP 荧光轻度取决于病毒感染细胞的颗粒数、细胞本身的增殖状态、细胞类型以及观察时间等。一般来讲，目的细胞感染病毒颗粒数越多，细胞本身增殖越快，GFP 荧光会越强。Adenovirus 属于腺病毒，一般在增殖较快的细胞中病毒感染 48-72h 后，GFP 基因表达才达到高峰。对于增殖较慢的细胞，GFP 基因表达时间还会延长。

腺病毒作为优秀的外源基因转移载体，通常原则上插入的目的基因序列可达6~8kb。我们保证腺病毒保证滴度达到 10 次方滴度的包装容量在 5Kb 以下，一般不超过 4.6Kb。