稳转株可以稳定遗传的,没有固定的代数,构建好的稳转株用嘌呤霉素维持下就可以,直接在培养基中加一定浓度的嘌呤霉素,浓度一般是筛选浓度的一半。实验周期长的话,细胞最好2个月换一批新的。
可以用带转运肽的Gcamp6跟普通Gcamp6,分别带两种不同的荧光,这得转两个载体进去,腺病毒(adenovirus)感觉比较常用。
可以是可以,有文献用siRNA和质粒转染的,但是神经元细胞本身比较难转染,建议还是用病毒做。
我给ac16细胞转了sirna,带cy3标签,我们这边有测定荧光吸光度的酶标仪,可以用来测定转染效率吗?
我构建了一个miRNA过表达的慢病毒,那之前检测细胞miRNA表达的时候逆转录用的茎环引物还可以用在用了慢病毒的细胞上吗?
使用带luc标签的腺相关病毒AAV做动物实验,想问一下把动物处死了,取材还可以拍荧光吗?
想做基因敲除,敲掉肺部巨噬细胞的一个表面蛋白ffar2,但我查了一下,这个蛋白是7次跨膜蛋白,会不会增加敲除难度啊?
可以的,但是背景太高,灵敏度低,发文章还是推荐用生物发光(Luc)。
iu/ml是浓度单位。指一种物质在液体中的浓度,即每公升液体中所含国际单位的量。由于有的药品含量不稳定必须与标准品进行比较就采用效价用IU(国际单位)来表示。应该是个任意单位,不是固定的
对照需要的话就是pgl3空载,也可以转个内参,但其实有的文献也没转
不一定有效果,最好根据小鼠基因重新设计。如果大鼠干扰靶点序列不能与小鼠基因CDS序列完全匹配,则干扰效果不佳或者无效果。即使序列完全匹配,大鼠干扰靶点序列由于未经blast,在小鼠中可能会有脱靶效应。
会影响,会影响GFP构象。但是固定用的一般就是醇类、醛类,都会有所影响,但是要用。建议用4%多聚甲醛来固定的,组织一般是过夜固定,注意固定时间不要过长。
可以带上不同的标签蛋白,去做coip。可以构建某个结构域缺失的,然后做coip,看哪个结构域缺失的没有结合,或者单独做这个基因的结构域。
可能是病毒加多了 最好测个moi;还有就是目的基因是不是容易致死,看看对照病毒怎么样,如果这样需要换细胞,或者 换其他的病毒。
AAV5和AAV6,我了解到的一般是2周开始有表达,3-4周表达高峰,可以维持表达3-6个月,如果造模时间长,在2个月左右就补打一次比较靠谱
使用了ADV注射小鼠,但是要6周后才能取样,有什么方法可以延长目的基因的表达时间?
细胞培养一段时间后,有的培养基颜色发生了变化,有点偏黄,有的培养基还是红色,是为什么?
我想用慢病毒做小鼠海马注射,多少量比较合适?多久看结果比较好?
我在文献里看到有人小胶质用ALDH1I1这个启动子的基因鼠,是不是我也可以用这个启动子做载体包aav呢?
设计sgRNA要注意哪些问题?
用puro筛选细胞,筛选完成后,后期培养细胞的时候是不是还要加一定量的puro维持呢?
做敲除发现基因只有一部分被敲除了,还剩一部分,如果继续全部敲除该怎么办啊?
我想问一下,我在网站上预测miRNA跟靶基因的时候,结果里有保守区结合和非保守区结合,这两个有什么区别呢?我做实验的时候应该选哪个比较好?
我买回来的慢病毒lentivirus的质粒,穿梭质粒,想要自己包装,然后重悬了保存,用什么培养基?
看看有没有收录人源的,一般转录因子的结合位点比较保守,所以也可以选择用人源的转录因子预测。或者是其他网站hTFtarget什么的也有结合位点预测功能。