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炫彩大摆锤

用户名:炫彩大摆锤

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最后活动于9 天前
回复了主题  › 我想做个转录因子跟启动子(promoter)结合位点预测,去jarspa找不到小鼠源的这个转录因子,要怎么预测啊?

看看有没有收录人源的,一般转录因子的结合位点比较保守,所以也可以选择用人源的转录因子预测。或者是其他网站hTFtarget什么的也有结合位点预测功能。

«  9 天前
回复了主题  › 用慢病毒(lentivirus)构建好的稳转株一般能稳定多少代啊?

稳转株可以稳定遗传的,没有固定的代数,构建好的稳转株用嘌呤霉素维持下就可以,直接在培养基中加一定浓度的嘌呤霉素,浓度一般是筛选浓度的一半。实验周期长的话,细胞最好2个月换一批新的。

«  9 天前
回复了主题  › 我想胞内Ca2+和线粒体内Ca2+用不同的激发光区激活,同时测定,是用Gcamp6吗?怎么区分它们的定位呢?

可以用带转运肽的Gcamp6跟普通Gcamp6,分别带两种不同的荧光,这得转两个载体进去,腺病毒(adenovirus)感觉比较常用。

«  9 天前
回复了主题  › 原代神经元细胞可以用siRNA和质粒转染吗?

可以是可以,有文献用siRNA和质粒转染的,但是神经元细胞本身比较难转染,建议还是用病毒做。

«  9 天前
创建了主题  › 我给ac16人心肌细胞转了sirna,带cy3标签,我们这边有测定荧光吸光度的酶标仪,可以用来测定转染效率吗?

我给ac16细胞转了sirna,带cy3标签,我们这边有测定荧光吸光度的酶标仪,可以用来测定转染效率吗?

«  22 天前
创建了主题  › 我构建了一个miRNA过表达的慢病毒(lv,lentivirus),那之前检测细胞miRNA表达的时候逆转录用的茎环引物还可以用在用了慢病毒的细胞上吗?

我构建了一个miRNA过表达的慢病毒,那之前检测细胞miRNA表达的时候逆转录用的茎环引物还可以用在用了慢病毒的细胞上吗?

«  22 天前
创建了主题  › 使用带荧光素酶luc标签的腺相关病毒AAV做动物实验,把动物处死了,取材还可以拍荧光吗?

使用带luc标签的腺相关病毒AAV做动物实验,想问一下把动物处死了,取材还可以拍荧光吗?

«  22 天前
创建了主题  › 我想做基因敲除(ko,knocout),敲掉肺部巨噬细胞表面的ffar2,但我查了一下,这个蛋白是7次跨膜蛋白,会不会增加敲除难度啊?

想做基因敲除,敲掉肺部巨噬细胞的一个表面蛋白ffar2,但我查了一下,这个蛋白是7次跨膜蛋白,会不会增加敲除难度啊?

«  23 天前
回复了主题  › 制备的腺相关病毒(aav)载体上带了EGFP,可以用来看活体成像吗?

可以的,但是背景太高,灵敏度低,发文章还是推荐用生物发光(Luc)。

«  30 天前
回复了主题  › 之前在一些宣传单上看到慢病毒(lentivirus)滴度写的IU/mL,这个单位是什么意思?

iu/ml是浓度单位。指一种物质在液体中的浓度,即每公升液体中所含国际单位的量。由于有的药品含量不稳定必须与标准品进行比较就采用效价用IU(国际单位)来表示。应该是个任意单位,不是固定的

«  30 天前
回复了主题  › 我想做检测cAMP通路活性的双荧光素酶实验,用CRE报告质粒(plasmid)的时候需要买内参吗?

对照需要的话就是pgl3空载,也可以转个内参,但其实有的文献也没转

«  30 天前
回复了主题  › ​之前根据大鼠基因设计了siRNA,经实验验证是有效的,这个基因的大鼠和小鼠序列相似度很高,在95%以上,请问可以用来做小鼠的干扰吗?

不一定有效果,最好根据小鼠基因重新设计。如果大鼠干扰靶点序列不能与小鼠基因CDS序列完全匹配,则干扰效果不佳或者无效果。即使序列完全匹配,大鼠干扰靶点序列由于未经blast,在小鼠中可能会有脱靶效应。

«  30 天前
回复了主题  › 多聚甲醛固定组织会影响荧光吗?

会影响,会影响GFP构象。但是固定用的一般就是醇类、醛类,都会有所影响,但是要用。建议用4%多聚甲醛来固定的,组织一般是过夜固定,注意固定时间不要过长。

«  2023-02-24
回复了主题  › 请教一下做蛋白不同结构域蛋白互作,应该通过什么标记来看他们是否有互作呢?

可以带上不同的标签蛋白,去做coip。可以构建某个结构域缺失的,然后做coip,看哪个结构域缺失的没有结合,或者单独做这个基因的结构域。

«  2023-02-24
回复了主题  › 同一个细胞,感染目的基因过表达的慢病毒出现了大量死亡的现象,但感染敲低的慢病毒就没有出现这种情况,是什么原因?

可能是病毒加多了 最好测个moi;还有就是目的基因是不是容易致死,看看对照病毒怎么样,如果这样需要换细胞,或者 换其他的病毒。

«  2023-02-24
回复了主题  › 想感染小鼠肺部,一般用AAV什么血清型,几周到几周表达高峰期?

AAV5和AAV6,我了解到的一般是2周开始有表达,3-4周表达高峰,可以维持表达3-6个月,如果造模时间长,在2个月左右就补打一次比较靠谱

«  2023-02-24
创建了主题  › 使用了腺病毒注射小鼠,但是要6周后才能取样,有什么方法可以延长目的基因的表达时间?

使用了ADV注射小鼠,但是要6周后才能取样,有什么方法可以延长目的基因的表达时间?

«  2023-02-17
创建了主题  › 细胞培养一段时间后,有的培养基颜色发生了变化,有点偏黄,有的培养基还是红色,是为什么?

细胞培养一段时间后,有的培养基颜色发生了变化,有点偏黄,有的培养基还是红色,是为什么?

«  2023-02-17
创建了主题  › 我想用慢病毒做小鼠海马注射,多少量比较合适?多久看结果比较好?

我想用慢病毒做小鼠海马注射,多少量比较合适?多久看结果比较好?

«  2023-02-16
创建了主题  › 有基因鼠上用ALDH1I1启动子,是不是我也可以用这个启动子做载体包aav?

我在文献里看到有人小胶质用ALDH1I1这个启动子的基因鼠,是不是我也可以用这个启动子做载体包aav呢?

«  2023-02-16
创建了主题  › 想自己设计sgRNA,有什么需要注意的吗?

设计sgRNA要注意哪些问题?

«  2023-02-09
创建了主题  › 稳转株筛完之后要不要加药继续维持呢?

用puro筛选细胞,筛选完成后,后期培养细胞的时候是不是还要加一定量的puro维持呢?

«  2023-02-09
创建了主题  › 做敲除发现基因只有一部分被敲除,想继续全部敲除怎么办?

做敲除发现基因只有一部分被敲除了,还剩一部分,如果继续全部敲除该怎么办啊?

«  2023-02-09
创建了主题  › 网站上预测miRNA跟靶基因的结果里有保守区结合和非保守区结合,这两个有什么区别呢?我做实验的时候应该选哪个比较好?

我想问一下,我在网站上预测miRNA跟靶基因的时候,结果里有保守区结合和非保守区结合,这两个有什么区别呢?我做实验的时候应该选哪个比较好?

«  2023-02-09
创建了主题  › 买回来慢病毒质粒lentivirus想要自己包装,然后重悬了保存,用什么培养基?

我买回来的慢病毒lentivirus的质粒,穿梭质粒,想要自己包装,然后重悬了保存,用什么培养基?

«  2022-09-27