可以采用活体成像技术,前提是需要给肿瘤细胞带上荧光标记,可以是荧光素酶或者荧光蛋白标记都可以;另外,活体成像仪的光谱检测范围要在所带荧光标记的光谱范围内。
IP拉下来的目的蛋白量较少主要可能是三个原因:①可能是IP抗体的亲和力不足;②另一个原因可能是目的蛋白本身的表达量较低;③裂解细胞时蛋白被降解。如果是抗体的问题,就需要更换新抗体
AAV感染骨髓不推荐采用尾静脉注射,很难感染到骨髓腔内,更建议采用骨内注射。
可以做的,但是miRNA
如果排除实验操作问题的话,可能是因为细胞本身的蛋白表达量低,可以采用外源性过表达提高目的蛋白的表达量。
不是的。建议使用激光共聚焦显微镜来观察,将绿光和红光的细胞图像merge后,统计单个细胞内的红色荧光点数和黄色荧光点数,然后计算它们的比值即可反映自噬流的情况。
AAV应用时效果不理想的有关影响因素很多,从病毒本身到检测目的基因表达这些过程都有涉及,具体可以从以下几个方面来分析:
对照也检测到Flag标签可能有两个原因:一个可能是抗体的非特异性结合,导致出现非特异性条带,建议更换特异性较好的抗体;另一个可能是蛋白样品存在交叉污染,注意优化细胞培养、提蛋白及上样时
如果排除调控目的基因会致死的原因,这种情况很可能跟细胞状态有很大关系,即在感染前后细胞状态就已经下降,此时还未表现出大量死亡的现象,但一经消化传代后,细胞状态也在持续下降,导致可能出现有大量细胞飘起或不再贴壁。因此进行感染前要注意将细胞状态先调整好,例如适当提高血清浓度、定时换液等操作;或是选用状态好的细胞。
有的。分子伴侣介导自噬(CMA)的底物中均含有一个能被分子伴侣HSC70
CCK-8试剂盒不适合用于检测含有色素或颜色的样品,可能会影响检测结果;另外含有还原剂的样品在加入CCK-8
答案是可以的,但是有风险、有条件的。通过AAV利用Crispr/Cas9技术做在体敲除,理论上可以实现但实


在没有转基因动物的情况下,可以利用工具病毒在体内建立cre