敲除株筛选是不是直接通过抗性筛选就可以了?

By 减肥呀减肥呀 at 2023-09-18 • 0 人收藏 • 245 人看过

敲除株筛选是不是直接通过抗性筛选就可以了?

1 个回复 | 最后更新于 2023-09-20
2023-09-20   # 1

不是的,通过抗性筛选可以将为转染成功的细胞杀死,留下的都是转染成功的细胞。
Cas9 对靶基因的编辑会产生几种不同的情况:indel(基因序列发生的插入或缺失改变)。
Indel 又有 3 倍数碱基和非 3 倍数的,前者造成的结果是氨基酸的插入或缺失,这种情况编
辑位点前后的氨基酸序列不变,不认为是一个成功的敲除。后者造成移码突变,编辑位点后
的氨基酸序列发生紊乱,这种是成功的敲除,翻译出来的代表序列会被降解掉,在混合细胞
中这几种情况同时存在,即使在同一个细胞中,大部分细胞也是这几种情况同时存在的。所
以我们需要进行单克隆筛选,通过有限稀释,挑单克隆进行测序,根据测序结果来判断是否
成功敲除。

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