慢病毒载体感染肿瘤细胞建系后做裸鼠成瘤，但基因片段很长怎么办？

2015-11-25   # 1

首先，插入片段在5kb的慢病毒基本包不出来（因为还要启动子，各种其他元件，筛选元件等），即使包出来慢病毒滴度也很低，用慢病毒建稳转系成功率很低。如果一定要建稳转系，可考虑质粒载体直接电转进行稳筛，不过周期需要大概3-6个月。另外，针对这个问题，我不认为非得稳转细胞株才能做后续的裸鼠成瘤实验。5kb包慢病毒难，包腺病毒还是可以实现的。那么腺病毒可以做裸鼠成瘤吗？其实完全可以，只是腺病毒与肿瘤裸鼠成瘤实验的作用方式，与慢病毒截然不同。慢病毒是先做成稳转株，然后皮下成瘤（当然还有其他成瘤），进一步观察瘤子的发展；腺病毒则是先用野生的肿瘤细胞系成瘤，在瘤子长出可见后（约3周），行瘤内腺病毒注射，以观察转导基因对肿瘤发展的影响。可以这么说，瘤内注射腺病毒对肿瘤进行抑制，比稳转系更有临床治疗的意义。另外还有一个驳论：目的基因过表达是抑制肿瘤的，为何这样的稳转肿瘤细胞系还能建的成？这个细胞系本身特点是自身生长受到抑制，且可以稳定遗传？如果抑制效率足够高，那这相当于要造一个可以生孩子的太监！其实，针对抑制肿瘤的基因过表达，我的建议是，不要去建什么稳转株，而采取瘤内注射抑制野生瘤体生长的方式更好。腺病毒，腺相关病毒（AAV）行肿瘤瘤体注射，比起稳转株研究肿瘤发展瘤体大小，应该更加合适。