sgrna活性怎么验证？

2022-07-29   # 1

是先构建cas9-grna质粒，然后转工具细胞（细胞里没有这个基因的话，先转一个过表达质粒），转染后72h左右（至少48h），将细胞提取DNA，然后用基因的引物扩增基因（扩大概500bp左右），扩出的片段再用T7E1酶切，看酶切出的条带，如果切开的两个条带越亮，说明酶切活性越好；还要进行测序，主要以测序结果为准。引物设计是尽量选靶序列前后距离不一样的，酶切出的条带不一样才好能区分。