puro浓度预实验是怎么做的？

2022-07-29   # 1

一般为了筛选到稳定表达待研究基因的细胞株，确定杀死未转染细胞的最低浓度嘌呤霉素至关重要。所以初次做实验的时候一定要建立适合自己体系的杀死曲线( kill curve )： (1) 96孔板内以5-8x 10^3 cells/孔的密度铺板，铺足够量的孔以进行后续的梯度实验，细胞孵育过夜； (2) 准备筛选培养基-含不同浓度嘌呤霉素的新鲜培养基(如0-10μ g/mL，至少5 个梯度)； (3) 细胞孵育过夜后加入筛选培养基，孵育细胞； (4) 约2-3天更换新鲜的筛选培养基； (5) 每日监测细胞观察存活细胞比例。嘌呤霉素的最佳作用时间一般在1-3天之间； (6) 最小的抗生素使用浓度就是指从抗生素筛选开始3天内杀死所用细胞的最低筛选浓度。