小恒学术问答
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最后活动于2023-05-10
回复了主题 › 老师您好，我想请教一下，我买的重组腺病毒载体（Recombinant adenovirus vectors）用差不多了，可是后面可能还得用，需要重新包毒吗？
腺病毒可以在293A细胞中自我复制，因此可参考腺病毒包装过程中的扩增步骤进行病毒扩增，可以不用重新包毒。
« 2023-05-10
回复了主题 › 慢病毒（lentivirus vector, LV）筛选稳转株之后，培养一段时间检测没有过表达（干扰）效果？
慢病毒感染细胞用puromycin筛选得到稳转株之后，需要定期使用含有puromycin的培养基培养细胞，以免出现基因丢失的情况。建议后期培养浓度可以按照1/10~1/2的筛选浓度。
« 2023-05-10
回复了主题 › siRNA下调效果很好，但是包装成shRNA病毒后，下调效果变差是什么原因？
siRNA和shRNA在结构上是不一样的，siRNA为化学合成，使用浓度一般为5μM，浓度较高，如细胞转染效率尚可，瞬时进入细胞中的分子数超过10^8，且不需要经过剪切加工就可和靶点结合，干扰效率高。
shRNA则是将干扰基因克隆到载体上，经过病毒整合（慢病毒）或非整合（腺病毒，腺相关病毒）进入到细胞后，转录形成发夹RNA，再经过一系列酶的剪切加工，才形成可以和靶点结合的干扰RNA。这个过程中因为拷贝数低（如慢病毒需要整合基因组），转录加工过程复杂，会导致干扰效果不理想。
另外，单从碱基数上来说，siRNA一般为19nt， shRNA一般长度为21nt或25nt
« 2023-05-10
创建了主题 › 为什么我的细胞感染带荧光的慢病毒后要曝光很长时间才能观察到荧光？
« 2023-04-26
创建了主题 › 我的细胞能被病毒感染，检测有过表达效果，但为何GFP荧光很弱？
« 2023-04-26
创建了主题 › 我想把病毒稀释后使用，如何进行稀释呢？
« 2023-04-26
« 2023-04-26
创建了主题 › 我想做诱导因素对某一个启动子活性的调节作用，这种应该是用什么荧光素酶载体呢？
我想做诱导因素对某一个启动子活性的调节作用，这种应该是用什么荧光素酶载体呢？
« 2022-09-27
创建了主题 › 我用sirna来做敲低，发现用量低的反而比用量高的siRNA敲低效果要更好，这种情况是正常的吗？
我用sirna来做敲低，发现用量低的反而比用量高的siRNA敲低效果要更好，这种情况是正常的吗？
« 2022-09-27
创建了主题 › 自己做双荧光素酶实验，最后检测的荧光值很低，只有几十到几百是什么原因？
自己做双荧光素酶实验，最后检测的荧光值很低，只有几十到几百是什么原因？
« 2022-09-27
这个需要看情况，如果预测位点是转录因子的结合位点的话，进行突变后可能会降低了转录效率，LUC表达减少，LUC值就随之降低了；如果预测位点不是的话，可能影响不大。做预测结合位点突变，也正是验证二者具体结合位点的方法