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最后活动于26 天前
回复了主题  › 为什么细胞解冻后缺乏活力,活细胞占比比较低?

可能的原因有,1.细胞冻存量过低,2.细胞降温速度欠佳,3.复苏时处理速度太慢,复苏过程不当

«  26 天前
回复了主题  › 细胞生长速度缓慢有哪些原因呢?

影响细胞生长因素有多种,可能是培养基有污染,胰蛋白酶消化过度,细胞传代次数过多,接种细胞起始浓度太低或太高等。

«  26 天前
回复了主题  › AD-mKeima和AD-mito-mTurquoise2/AD-mcherry-LC3这两种线粒体自噬产品有什么区别?

mKeima 所表达的Keima 蛋白定位于线粒体基质, 当线粒体自噬体与酸性溶酶体融合后Keima 蛋白的荧光信号由绿色转为红色,荧光信号的转换可定量反映线粒体自噬的发生发展,是研究线粒体自噬不可或缺的利器。

而mcherry-LC3标记自噬小体,用mito-mTurquoise2标记线粒体。mito-mTurquoise2线粒体特异性定位荧光探针(pHBdsred-mito)可准确标记定位线粒体,两者共转染细胞即可准确实时地追踪线粒体自噬的动态过程。


«  26 天前
回复了主题  › 做间接法免疫荧光染色,要怎么设置对照?

要设置两组对照

«  26 天前
回复了主题  › 腺相关病毒(AAV)为什么不常使用PFU、TCID50等方式检测滴度?

AAV 感染不会导致细胞病变效应,因此,空斑实验不能用于确定其感染滴度,而TCID50法一般需要利用腺病毒作为辅助病毒,另一方面,常用的活性颗粒检测方法需要在细胞中检测,AAV基因的表达需要较长时间,检测效率低。基因组滴度以AAV衣壳中所含基因组含量作为定量依据,测定的是含目标基因组的AAV浓度,方法简单高效。

«  26 天前
回复了主题  › 不同滴度测定方法有什么有优缺点?

滴度(Titer):即单位体积中有感染能力的病毒数目。有几种不同的滴度的测定方法,各有适用范围。P24核心蛋白定量法,是比较经典的方法,简单重复性好,测定的是物理滴度。RNA基因组定量法,是测的物理滴度,精度高,但对仪器和操作的要求高。GFP荧光法,测定的是生物滴度,也是一种经典方法,简单重复性好。基因组DNA定量PCR的方法和荧光法是目前常用的慢病毒滴度检测方法。

«  26 天前
回复了主题  › 保存过久的病毒需要重新检测滴度吗?

一般是-80℃保存半年以上需要重新测量滴度。

«  26 天前
回复了主题  › 慢病毒(lentivirus)滴度检测中抗生素筛选法和荧光报告基因法有很大的区别吗?

荧光报告基因法检测慢病毒滴度相对比较简单,在感染病毒2天后荧光显微镜,因为加入的病毒是稀释过的,通过计算出来的数值再乘以稀释倍数即可。而慢病毒载体如果没有荧光报告基因,只有抗性筛选标记的话,可以用抗生素筛选来测定滴度。这个方法筛选稳转株时间相对比较久一点。


«  26 天前
«  26 天前
回复了主题  › 请问用CRISPR-Cas9做敲入时,我订购的donor质粒同源臂序列前面为什么还带启动子?难道需要转录才能成为模板吗? donor质粒同源臂载体不必带启动子,不需要表达,带启动子也没有
«  26 天前
回复了主题  › 2、我们用CRISPR-Cas9构建了一株敲除株,现在想过表达被敲除的基因,请问过表达进去的基因还会被CRISPR-Cas9继续敲掉吗?

这个需要具体分析,gRNA序列是否设计在CDS上,已经敲除株中是否还有CAS9及gRNA。

«  26 天前
回复了主题  › 对乳鼠进行腺相关病毒(aav)干扰全身转染,推荐用什么方法呢?

达到全身感染比较难的,可以尝试用光普型血清型AAV9,和广普型启动子CMV启动子,通过尾静脉注射方式进行感染。

«  26 天前
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创建了主题  › 细胞转染试剂如何选择?


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创建了主题  › 细胞转染前核酸如何准备 ?


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