小恒学术问答
» 拦路妖
最后活动于1970-01-01
回复了主题 › 用慢病毒（lentivirus）过表达目的基因后，WB检测发现LC3II/I蛋白增加的，beclin1蛋白增加，而P62蛋白也是
如果自噬流正常，LC3II/I蛋白增加的，beclin1蛋白增加，则P62蛋白是减少的（可溶性p62减少，不可溶p62不变）；如果自噬流发生阻碍，如自噬体与溶酶体融合受阻时,p62 会显著性堆积，出现LC3II/I蛋白增加的，beclin1蛋白增加，P62蛋白也是增加的现象（可溶性p62减少，不可溶性p62显著增加）。因此，根据wb结果来看，目的基因的过表达可能影响了自噬溶酶体的形成，这是正常的实验现象。
« 2021-01-25
回复了主题 › 用腺相关病毒AAV感染小鼠肝脏，目的基因可以稳定过表达5个月？
AAV在体的表达周期可以持续3-6个月，但是不同的器官表达周期有差别。建议做预实验摸索一下具体的表达周期。
« 2021-01-21
回复了主题 › 神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y慢病毒（lentivirus）感染MOI一般是多少？
这个细胞慢病毒比较好感染，慢病毒MOI在 5-10左右摸索一下就行
« 2021-01-18
创建了主题 › circRNA的junction位置为连续A，设计干扰序列时出现连续T，为了在U6启动之下正常转录，可突变掉个别T吗?
circRNA的junction位置为连续A，设计干扰序列时出现连续T，为了在U6启动之下正常转录，可突变掉个别T吗?
« 2021-01-15
创建了主题 › 构建的质粒上有neor（kanr）抗性基因，这个是什么抗性？
构建的质粒上有neor（kanr）抗性基因，这个是什么抗性？
« 2021-01-12
回复了主题 › 小鼠的胃部用那种血清型的腺相关病毒AAV感染效果好一些？
胃部感染案例较少，建议使用广谱型的血清型如AAV9感染
« 2021-01-08
回复了主题 › 用siRNA做干扰有效果，为什么把这个序列包装成慢病毒做干扰效果不好了呢？
来了，这个siRNA和shRNA还是有所不同，siRNA是双链的RNA的结构，可以直接跟靶点结合进行作用的，效率比较高，shRNA是一个构建到质粒上或者包成病毒，需要转录形成发夹结构的shRNA，经过酶切，才能跟靶点结合，这个过程可能因为拷贝数低，转录过程复杂导致干扰效果不佳的。
« 2021-01-04
回复了主题 › 自噬双标病毒是过表达的外源性mcherry-GFP-LC3为什么能检测内源性的自噬水平？
过表达了自噬相关基因，实现了自噬可视化，检测自噬水平。LC3是自噬相关蛋白，自噬发生时与自噬小体结合，LC3与mcherry，GFP融合表达，所以自噬发生时在红光和绿光通道下可以看到聚集的红色和绿色斑点，斑点数量越多代表自噬小体数量越多，自噬发生程度越高。
« 2020-12-28
回复了主题 › 纯化腺病毒（adenovirus）注射T0时期的小鼠海马区，一只小鼠打多少？
T0时期的小鼠比较小，建议注射0.1 ul左右
« 2020-12-25
回复了主题 › 用aav(腺相关病毒)感染脂肪,可以用什么血清型?
感染脂肪组织可以用aav8和aav9这两个血清型。
« 2020-12-24
回复了主题 › 能够抑制自噬小体和溶酶体融合的药物有哪些？
氯喹和巴氟洛酶素
« 2020-12-23
创建了主题 › 人骨肉瘤细胞HOS慢病毒（lentivirus）感染MOI是多少？
人骨肉瘤细胞HOS慢病毒（lentivirus）感染MOI是多少？
« 2020-12-23
回复了主题 › 小鼠乳癌细胞4T1慢病毒感染MOI是多少？
慢病毒（lentivirus）MOI推荐10-20左右。
« 2020-12-22
回复了主题 › 注射过腺相关病毒AAV的注射器等物品可以直接扔掉吗
沾染过工具病毒的相关器物需要经过消毒液浸泡或者其他安全处理后放到实验室指定位置，统一处理，不可以随意丢弃。
« 2020-12-22
创建了主题 › 做好的标本还能用自噬双标慢病毒（lentivirus）检测自噬流吗
做好的标本还能用自噬双标慢病毒（lentivirus）检测自噬流吗
« 2020-12-17
创建了主题 › su-dhl-4 这个细胞可以用慢病毒感染吗？效果如何
su-dhl-4 这个细胞可以用慢病毒感染吗？效果如何
« 2020-12-16
回复了主题 › 小鼠乳腺癌细胞4T1慢病毒（lentivirus）感染MOI一般是多少？
小鼠乳腺癌细胞比较难感染，建议MOI 100左右
« 2020-12-15
创建了主题 › 小鼠乳腺癌细胞4T1慢病毒（lentivirus）感染MOI一般是多少？
小鼠乳腺癌细胞4T1慢病毒（lentivirus）感染MOI一般是多少？
« 2020-12-15
回复了主题 › 人前列腺癌细胞PC-3慢病毒（lentivirus）感染MOI是多少？
可以在20-40这个范围内摸索一下
« 2020-12-14
创建了主题 › 人前列腺癌细胞PC-3慢病毒（lentivirus）感染MOI是多少？
人前列腺癌细胞PC-3慢病毒（lentivirus）感染MOI是多少？
« 2020-12-14
回复了主题 › 小鼠肺癌细胞LLC慢病毒（lentivirus）感染MOI是多少？
慢病毒MOI推荐10
« 2020-12-11
回复了主题 › 细胞已经转了一个绿色荧光蛋白，现在想做自噬研究，可以看自噬流吗？
已经带了绿色荧光，就不能再用自噬双标的了，可以用红光单标。
« 2020-12-10
回复了主题 › 蛋白后面要做亲合纯化，用什么标签好呢？
flag，6*his都可以，只要有带相应的亲合配体对的磁珠就可以，这些应该都是有商业化的产品。
« 2020-12-10
回复了主题 › 慢病毒（lentivirus）过表达载体上构建的3flag标签蛋白分子量是多少？
3flag蛋白标签是24个氨基酸，分子量大约2.6 kda。
« 2020-12-07
创建了主题 › 几种病毒做cas9敲除有区别吗？做敲除需要稳转吗？
几种病毒做cas9敲除有区别吗？做敲除需要稳转吗？
« 2020-12-07
创建了主题 › 慢病毒（lentivirus）感染干细胞，过表达启动子能用CMV启动基因表达吗？
慢病毒（lentivirus）感染干细胞，过表达启动子能用CMV启动基因表达吗？
« 2020-11-13
创建了主题 › 用腺相关病毒AAV2大鼠玻璃体腔注射感染眼睛，一次注射多少腺相关病毒？
用腺相关病毒AAV2大鼠玻璃体腔注射感染眼睛，一次注射多少腺相关病毒？
« 2020-11-05
回复了主题 › 淋巴瘤细胞RAJI慢病毒（Lentivirus）感染的MOI是多少？
慢病毒MOI推荐1-10
« 2020-11-03
回复了主题 › 腺病毒感染原代肝细胞的Moi是多少呢
腺病毒MOI推荐10-30
« 2020-10-29
回复了主题 › 人白血病细胞K562质粒转染效率很低，有其他高转染效率的方法吗
K562很难转染，建议用慢病毒感染或者改造过的腺病毒
« 2020-10-26
