刚开始做双荧光素酶报告法验证miRNA的靶基因，疑问如下

2014-12-26   # 1

目前看到的文献中的miRNA的表达载体一般有这样几种形式：1，pri-miRNA的部分序列，400BP左右，构建到含有CMV等启动子的载体上，不需要起始序列、终止序列、AAAAA等原件（当然酶切位点保护碱基啥的要有，除非你先整到T载体上），直接NCBI找到该miRNA的序列然后左右两翼扩展一下，总长达到400bp左右即可，以DNA为模版扩增。2，pre-miRNA，大约70多bp，因为这个要形成颈环结构，所以必须构建到含有H1或U6启动子的载体上，因为长度不大，所以可直接合成正反义两条链（有酶切位点，直接露出黏性末端即可，这样以后就不用再酶切了），体外退火成双链，然后连载体。3，成熟双链miRNA，直接按照miRNA的成熟序列（22bp左右）合成正反义两条链，体外退火成双链，连载体或者直接脂质体转染或者显微注射即可。