慢病毒感染肿瘤细胞 载体没有抗性 怎么筛选

2015-09-16   # 1

这两种方式都是可以的，流式分选的优势在于可以很快获得全GFP阳性的细胞群，而且为混合型的，但缺点是需要准备的细胞量比较多，通常10^8数量级了，另外获得的细胞群中由于部分细胞中属于非整合表达的，所以后续培养中会出现GFP丢失的现象。挑选GFP阳性细胞进行稳定株的筛选理论上也是可以的，就是将细胞进行无限稀释后接种至96孔板内培养，待克隆形成后选取GFP全阳性且为单克隆的孔，继续扩大培养，后进行鉴定即可。为保证成功率及避免非整合表达的状况，一般可多挑选GFP全阳性单克隆。从损伤的角度来说挑单克隆基本都不会产生细胞损伤，但因为缺少抗性基因都可能存在“稳定株”建成后GFP丢失的状况。