小恒学术问答
» momo
最后活动于2022-07-21
回复了主题 › miRNA与靶基因的双荧光素验证能不能在研究的细胞中进行？
miRNA 一般不需要在目的细胞中验证，因为miRNA，靶基因3’UTR均能在293T内表达及发挥功能；293T这种工具细胞转染效率高，其他细胞会涉及到转染效率的问题，一般不在目的细胞中验证。其他的双荧光素酶实验，比如启动子与转录因子，可选择在目的细胞中进行验证，但是也有转染效率的问题。
« 2022-07-21
回复了主题 › EGFP/mCherry 能不能用于活体成像
可以做，但是背景太高，灵敏度低，高分文章还是建议生物发光(用荧光素酶来标记)。相对来说，红光的穿透性在体内比蓝绿光的穿透性要好得多，可以选择近红外荧光作为观测生理指标。荧光发光是通过激发光激发荧光基团到达高能量状态，而后产生发射光；常用的有绿色荧光蛋白(GFP)、红色荧光蛋白 DsRed 及其它荧光报告基团；虽然荧光信号远远强于生物发光，但非特异性荧光产生的背景噪音使其信噪比远远低于生物发光。目前大部分高水平的文章还是应用生物发光的方法来研究活体动物体内成像。但是，荧光成像有其方便，便宜，直观，标记靶点多样和易于被大多数研究人员接受的优点，在一些植物分子生物学研究和观察小分子体内代谢方面也得到
« 2022-07-21
回复了主题 › mir的模拟完和抑制物分成熟体前体吗？
通常都是用的mir成熟体的模拟物，用转染试剂转染。
« 2022-03-22
回复了主题 › 如何筛cas9稳定株
筛cas9稳定株后，验证cas9表达是可以用抗性基因筛选出来的，最后用基因测序鉴定；cas9的慢病毒带flag，一般认可的是用这个标签也可以鉴定。
« 2022-03-22
回复了主题 › 养细胞时候杀真菌杀细菌
普通的双抗就可以啊，青霉素链霉素不行就用三抗。
« 2022-03-22
回复了主题 › 自噬病毒，转染到细胞，如果发生自噬，他就和自噬小体结合对吗？
自噬双标病毒系统的话，荧光用于标记及追踪LC3：由于GFP荧光蛋白对酸敏感，当自噬体与溶酶体融合后GFP荧光淬灭，GFP的减弱可以指示溶酶体与自噬小体的融合形成自噬溶酶体。
« 2022-03-22
回复了主题 › polybrene使用方法
随病毒一起加入就行了，polybrene是助转染试剂
« 2022-03-22
创建了主题 › 抗支原体试剂可以像双抗那样加入细胞培养液，进行维持培养吗？
抗支原体试剂可以像双抗那样加入细胞培养液，进行维持培养吗？
« 2022-03-22
创建了主题 › 腺病毒感染细胞进行过表达，多久可以检测呢？可以维持表达多久呀？
腺病毒感染细胞进行过表达，多久可以检测呢？可以维持表达多久呀？
« 2022-03-22
创建了主题 › 慢病毒或者腺病毒，如何去感染悬浮细胞呢？
慢病毒或者腺病毒，如何去感染悬浮细胞呢？
« 2022-03-22
创建了主题 › 为什么腺相关病毒不适合体外感染细胞？
为什么腺相关病毒不适合体外感染细胞？
« 2022-03-22
创建了主题 › 某种细胞的慢病毒感染复数MOI的摸索，需要干扰对照病毒和表达干扰靶点的病毒都去做摸索吗？
某种细胞的慢病毒感染复数MOI的摸索，需要干扰对照病毒和表达干扰靶点的病毒都去做摸索吗？
« 2022-03-22
回复了主题 › 视网膜推荐什么启动子aav
rpe65启动子和AAV-anc80L的血清型可以用来感染视网膜。
« 2022-02-25
回复了主题 › 带LUC载体的质粒能转到细菌里吗？
luc质粒一般是可以在原核内扩增的。
« 2022-02-25
回复了主题 › Hacat 可以接建系吗
人永生化表皮细胞，可以用慢病毒构建该细胞基因稳定过表达或者敲低稳转细胞株的。
« 2022-02-25
回复了主题 › 带病毒的针扎到手怎么办
挤出血涂碘伏，打破伤风没有用，相信自己的免疫系统，这些病毒没有复制能力，实在担心，就去医院 比如开点抗病毒药物利巴韦林。
« 2022-02-25
回复了主题 › 小干扰要换液吗？
转染试剂转染3-4小时后一般是可以换液的，或者根据细胞状态可以适当延长转染时间。
« 2022-02-25
创建了主题 › 想在体感染小鼠全身的巨噬细胞，这个可以实现吗？
想在体感染小鼠全身的巨噬细胞，这个可以实现吗？
« 2022-02-24
创建了主题 › 感染小鼠肺部用腺相关病毒，几型血清型比较好呢？
感染小鼠肺部用腺相关病毒，几型血清型比较好呢？
« 2022-02-24
创建了主题 › 基因启动子序列如何选取呀？
基因启动子序列如何选取呀？
« 2022-02-24
创建了主题 › 有没有好用的启动子转录因子结合位点预测网站？
有没有好用的启动子转录因子结合位点预测网站？
« 2022-02-24
创建了主题 › 用于敲低circRNA的干扰序列如何设计？以及circRNA qPCR检测引物如何设计呢？
用于敲低circRNA的干扰序列如何设计？以及circRNA qPCR检测引物如何设计呢？
« 2022-02-24
创建了主题 › 肝脏特异性启动子TBG可以在肝非实质细胞中启动表达吗？比如： 肝窦内皮细胞 。
肝脏特异性启动子TBG可以在肝非实质细胞中启动表达吗？比如： 肝窦内皮细胞 。
« 2022-02-24
创建了主题 › RAW264.7细胞可以用慢病毒LV做基因过表达或者敲低稳转细胞株吗？
RAW264.7细胞可以用慢病毒LV做基因过表达或者敲低稳转细胞株吗？
« 2022-02-24
创建了主题 › 如何做miRNA过表达？有什么好的方法推荐吗？
如何做miRNA过表达？有什么好的方法推荐吗？
« 2022-02-24
创建了主题 › 原代细胞可以用CRISPR做基因原位点突变吗？
原代细胞可以用CRISPR做基因原位点突变吗？
« 2022-02-24
创建了主题 › 腺相关病毒AAV感染小鼠肾脏有什么比较好的感染方法吗？
腺相关病毒AAV感染小鼠肾脏有什么比较好的感染方法吗？
« 2022-02-24
创建了主题 › 可以用病毒过表达miRNA吗？过表达前体还是成熟体呀？
可以用病毒过表达miRNA吗？过表达前体还是成熟体呀？
« 2021-12-02
创建了主题 › 慢病毒或者腺病毒感染细胞时，需要用无血清及无双抗的培液吗？
慢病毒或者腺病毒感染细胞时，需要用无血清及无双抗的培液吗？
« 2021-12-02
创建了主题 › 腺病毒感染细胞，目的基因表达可以维持多久？
腺病毒感染细胞，目的基因表达可以维持多久？
« 2021-11-25
