小恒学术问答
» lifangtang
最后活动于2022-03-22
回复了主题 › 某种细胞的慢病毒感染复数MOI的摸索，需要干扰对照病毒和表达干扰靶点的病毒都去做摸索吗？
不需要的，只要用对照病毒摸索出这个细胞合适的MOI就行，我一般用96孔板摸索，节省病毒。
« 2022-03-22
回复了主题 › 抗支原体试剂可以像双抗那样加入细胞培养液，进行维持培养吗？
可以的，这样起到一个预防的作用，还有专门卖细胞培养三抗的呢，就是在双抗的基础上加入了抗支原体试剂。
« 2022-03-22
回复了主题 › 腺病毒感染细胞进行过表达，多久可以检测呢？可以维持表达多久呀？
带荧光标记的腺病毒感染细胞，我一般36h-48h就看到很强的荧光信号了，一般这时候检测就可以了。通常在细胞里可以维持表达1周左右。
« 2022-03-22
回复了主题 › 慢病毒或者腺病毒，如何去感染悬浮细胞呢？
可以进行平角离心来感染很方便，这样操作：病毒液加入细胞培养皿后，封好口，放入平角离心机，低速离心 1 h，然后放入培养箱中正常培养即可；没有平角离心机的话，可以用离心管，将细胞吹打吸入离心管中，低速离心，去掉大部分上清，然后加入适量的病毒液，轻轻吹打混匀 5-10 下，室温放置 15 min（尽量不要超过 30 min，间隔 10min 可以再吹打一次），然后将细胞和含病毒的培养基同时吸出转入培养皿中进行培养即可。
« 2022-03-22
创建了主题 › polybrene使用方法
polybrene使用方法
« 2022-03-22
创建了主题 › 自噬病毒，转染到细胞，如果发生自噬，他就和自噬小体结合对吗？
自噬病毒，转染到细胞，如果发生自噬，他就和自噬小体结合对吗？
« 2022-03-22
创建了主题 › 养细胞时候杀真菌杀细菌
养细胞时候杀真菌杀细菌
« 2022-03-22
创建了主题 › 如何筛cas9稳定株
如何筛cas9稳定株
« 2022-03-22
创建了主题 › mir的模拟完和抑制物分成熟体前体吗？
mir的模拟完和抑制物分成熟体前体吗？
« 2022-03-22
回复了主题 › 用于敲低circRNA的干扰序列如何设计？以及circRNA qPCR检测引物如何设计呢？
circRNA敲低的干扰序列需要在成环接头处设计；qPCR检测引物可以跨接头设计看是否成环，或者一个引物在接头处设计验证精确成环，手动设计qPCR检测引物可以把circRNA序列的3'端100-200bp复制粘贴到其5'端，然后像正常设计线性基因的引物一样，在3'端的这100-200bp上设计正向引物（正向引物可在接头处设计），5'端设计反向引物即可。可以利用网站circRNA Interactome直接进行干扰序列或者qPCR引物设计（https://circinteractome.nia.nih.gov/）
« 2022-02-25
回复了主题 › 想在体感染小鼠全身的巨噬细胞，这个可以实现吗？
腺相关病毒在体感染全身巨噬细胞效果不一定好，如果要做的话，可以用巨噬细胞特异启动子尾静脉注射感染试试。
« 2022-02-25
回复了主题 › 肝脏特异性启动子TBG可以在肝非实质细胞中启动表达吗？比如： 肝窦内皮细胞 。
不可以的，TBG是肝脏实质细胞的启动子，在非实质细胞中不能启动基因表达。
« 2022-02-25
回复了主题 › RAW264.7细胞可以用慢病毒LV做基因过表达或者敲低稳转细胞株吗？
Raw264.7可以用慢病毒进行建系，但可能会比较容易极化，不建议加助转剂polybrene。
« 2022-02-25
回复了主题 › 如何做miRNA过表达？有什么好的方法推荐吗？
miRNA过表达，细胞比较好转染的话可以直接找公司合成mimics，如果不好转染的话，可以尝试慢病毒或者腺病毒，这种构建到载体上进行过表达miRNA的话更推荐过表达miRNA前体序列，相对表达效果会更好。
« 2022-02-25
回复了主题 › 原代细胞可以用CRISPR做基因原位点突变吗？
如果原代细胞传代能力差，不推荐CRISPR做原位基因突变，这个要求单克隆筛选，对增殖能力要求比较高。
« 2022-02-25
回复了主题 › 腺相关病毒AAV感染小鼠肾脏有什么比较好的感染方法吗？
腺相关病毒感染肾脏可以尾静脉注射，原位多点注射，肾盂注射，肾静脉注射等。
« 2022-02-25
回复了主题 › 感染小鼠肺部用腺相关病毒，几型血清型比较好呢？
腺相关病毒感染小鼠肺部， 我用的是5型。
« 2022-02-25
回复了主题 › 基因启动子序列如何选取呀？
基因的启动子序列选取可以参考一些相关的文献，或者通常选择基因上游2kb+下游200bp作为启动子也是一个比较保守的选择。
« 2022-02-25
回复了主题 › 有没有好用的启动子转录因子结合位点预测网站？
启动子转录因子结合位点预测网站可以用JASPAR、hTFtarget、AnimalTFDB3等（https://jaspar.genereg.net/、https://jaspar.genereg.net/、https://jaspar.genereg.net/）
« 2022-02-25
创建了主题 › 小干扰要换液吗？
小干扰要换液吗？
« 2022-02-24
创建了主题 › Hacat 可以接建系吗
Hacat 可以接建系吗
« 2022-02-24
创建了主题 › 带病毒的针扎到手怎么办
带病毒的针扎到手怎么办
« 2022-02-24
创建了主题 › 带LUC载体的质粒能转到细菌里吗？
带LUC载体的质粒能转到细菌里吗？
« 2022-02-24
创建了主题 › 视网膜推荐什么启动子aav
视网膜推荐什么启动子aav
« 2022-02-24
回复了主题 › 如果稳定制造细胞株？
用慢病毒感染后筛选，后面在挑取单克隆测序正确就好了
« 2021-11-19
创建了主题 › 为什么查到的miRNA有-1、-2、-3？
为什么查到的miRNA有-1、-2、-3？
« 2021-07-30
创建了主题 › 慢病毒到货后有必要做RCL检测吗？
慢病毒到货后有必要做RCL检测吗？
« 2021-07-30
创建了主题 › 肝癌细胞有什么适合建系的细胞
肝癌细胞有什么适合建系的细胞
« 2021-07-30
创建了主题 › RNAfit有沉淀是否正常?
RNAfit有沉淀是否正常?
« 2021-07-30
创建了主题 › 立体定位注射两种病毒该怎么办
立体定位注射两种病毒该怎么办
« 2021-07-30
