293t细胞包装病毒，包装时的10%DMEM中加入1%非必须氨基酸和丙酮酸钠，包装系统是PLVX-PURO（10 μg）、PSPAX2（7.5 μg）、PMD2G（2.5 μg）。在10cm皿中，收取48h（10ml）和72h（10ml）含病毒培养液，混合后用0.22微米的滤膜过滤，分装后保存于-80℃冰箱，使用前化冻，感染时六孔板中细胞融合率大约在50%，病毒体积设置了1ml、3ml、5ml梯度，polybrene浓度为5μg/mL，感染12h后换完全培养液，但是蛋白表达程度并没有随体积而增强，因为加入5ml病毒原液的皿中有很多细胞感染后死亡，所以我感觉病毒量应该够了，想不出原因，有人知道吗？

从公司买的慢病毒，看了说明书慢病毒感染细胞不要超过24小时，实验室师兄说可感染72小时都没事，只要细胞状态可以，我感染了48小时后换成正常培养基，细胞状态差点，48小时荧光已经很强，但今天做WB和contral组比没有差别（3组不同的细胞系），是不是感染时间太长，影响蛋白的合成，还是病毒的问题？（我的是分泌蛋白，细胞中表达量高，抗体CST的一秒就爆了）

因实验需要，需要向乳腺癌细胞231中转染CRISPR融合蛋白质粒，如果不算慢病毒本身的骨架，就有有13000bp，加上慢病毒，可能就超过15000bp。现在很纠结要不要采用慢病毒包装，因为不知道慢病毒转染大质粒的效率。请教各位大佬

之前都没有算过，最近表达不出来目的蛋白，想看一看是不是感染效率太低！求具体方法

请教一下，慢病毒感染的时候，如果不是用半体积转染，加的全体积培养基，对感染效率有影响吗？谢谢~

最近想直接在细胞表达一个基因，细胞是真核表达系统，所以是否可行。也知道慢病毒可以构建稳转，不知两者效率哪个更高。求大神指点迷津~

293、293T、293FT，都可用于包装腺病毒和慢病毒么？

哪个质粒系统做的效果不错，之前一直用的慢病毒，感染效率不太好，做动物实验效果也不好，求大神指点

请教，一般用于心肌细胞基因过表达的慢病毒载体有哪些？后期要用流式检测细胞凋亡，带不带荧光标记呢？带了会不会影响检测结果？

是心肌成纤维细胞

染病毒时用的完全培养基加了血清的，会不会是这个原因没有转进去?而且我是要做稳转株筛选。

用的moi=5，10,20，但是文献上和公司资料上最佳MOI值都是10啊，为啥没有光？

前一天拍荧光是这种情况
今天拍荧光是这样。
为啥变这样了呀？？？？求大神指点。