敲除株筛选是不是直接通过抗性筛选就可以了？

不是的，通过抗性筛选可以将未转染成功的细胞杀死，留下的都是转染成功的细胞。Cas9 对靶基因的编辑会产生几种不同的情况：indel、点突变。Indel 又有 3 倍数碱基的 indel 和非 3 倍数的 indel，前者造成的结果是氨基酸的插入或缺失，这种情况编辑位点前后的氨基酸序列不变，不认为是一个成功的敲除。后者造成移码突变，编辑位点后的氨基酸序列发生紊乱，这种是成功的敲除，翻译出来的代表序列会被降解掉，在混合细胞中这几种情况同时存在。所以我们需要进行单克隆筛选，通过有限稀释，挑单克隆进行测序，根据测序结果来判断是否成功敲除。