qPCR熔解曲线有杂峰,是什么原因?怎么改进比较好
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小脑斧123
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原因分析:杂峰在主峰之前,Tm约为70-75℃,一般为引物二聚体。引物二聚体主要是由于体系内引物与引物纠缠比引物与模板结合更容易导致的。杂峰在主峰之后,这种情况是非特异性扩增,可能是引物特异性不好引起的,也可能是空气中有气溶胶污染所导致。
解决方法:提高模板浓度或者退火温度、降低引物浓度、重新设计引物。