质粒转化感受态后长不出克隆或数量很少，是什么原因？

这类情况可能是以下原因导致的：① 感受态转化效率低，需更换新的感受态；② 使用的抗生素种类与质粒的抗性不一致；③ 连接步骤中目的片段与载体的比例失衡；④ 插入片段体系中含有金属络合剂等杂质，使连接酶失活而导致构建失败，注意纯化目的片段PCR产物即可；⑤ 转化过程中加入了过多的质粒，导致转化效率降低，质粒体积不应超过感受态细胞体积的1/10。