我做质粒转染效果一直不太理想，一般是什么原因呢？

质粒转染过程种有很多因素会影响转染效率，以下列举一些常见的因素作参考：

① 细胞类型：不同类型的细胞对外源DNA的摄取和转录表达能力存在差异，有些细胞内具有较强的内质网、溶酶体等限制因素，较难接受外源质粒DNA进入细胞，可通过查阅文献和预实验进行检验。

② 细胞状态和密度：转染时要选择细胞对数生长期，细胞密度在50%-80%最佳，细胞密度过高会严重影响细胞状态，进而导致转染效率下降；密度太低可能会使被没有转入质粒的细胞淹没。如果细胞状态不好或密度不适合，最好做相应的调整后再进行转染，否则只会造成浪费。另外细胞污染也是导致细胞状态差的常见因素。

③ 质粒的纯度：如果提取的质粒中含有盐离子、蛋白、内毒素等污染物会大大降低转染复合物的有效形成，内毒素会对细胞产生很大的毒性，因此一般用去内毒素的提取试剂盒进行抽提。

④ 质粒与转染试剂的比例：不同细胞以及使用不同转染试剂的效率差别很大，一般需要根据转染试剂说明书进行预实验，优化质粒与转染试剂的比例，摸索最佳转染条件。

抗生素：质粒转染过程中不建议使用含抗生素的培养基，因为转染过程中细胞通透性增加，会使抗生素进入细胞，进而降低细胞活性，导致转染效率下降。