荧光蛋白的种类有很多种,该怎么选呢?
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梧桐树下
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2023-12-29 •
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最后更新于 2024-01-02
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涉及荧光蛋白应用时,选择合适的荧光蛋白是实验成功关键之一。可以从八个方面考虑:
① 激发峰/发射峰:荧光蛋白激发波长和发射波长要在荧光显微镜的检测范围内,多种荧光蛋白同时使用时,不同荧光蛋白的波长之间需相差50-60nm以上;
② 单体性质:融合表达更推荐用单体荧光蛋白,多聚体会影响目的基因的功能和定位等;
③ pK值:荧光蛋白的pK值决定其最适pH;
④ 亮度:选择亮度高的便于成像和检测;
⑤ 光稳定性:便于稳定成像;
⑥ 成熟时间:形成发光基团需要一定的时间;
⑦ 氧气:许多荧光蛋白的成熟需要氧气,特别是衍生自GFP的那些荧光蛋白。
⑧ 温度:温度也会影响荧光蛋白的成熟时间和荧光强度,例如EGFP适合在37℃下使用。