我需要在细胞水平模拟磷酸化和非磷酸化，要如何突变？有哪些方法？需要注意哪些？

模拟磷酸化，一般是将磷酸化的位点突变为天冬氨酸（D），去磷酸化一般是将磷酸化位点突变为丙氨酸（A）；如何达到目的，首先要考虑是外源性突变还是内源性突变，如果是内源性突变，可以考虑用Crispr cas9的方法做敲入；如果是外源性的，可以构建相关的突变载体，可以用普通的过表达载体，也可以用病毒载体，包装成病毒后感染细胞；但是外源性的不会影响本底的磷酸化水平，如果该基因本底较低，建议先将本底基因敲除或者敲低后再模拟磷酸化，或者选择本底表达较低的细胞进行实验。