为什么我做实验用腺相关病毒（ aav） 体外感染效率很低 (AAV 在细胞上的表达远比不上在动物体内的表达)？

AAV 载体在体外实验中用于感染细胞时，常发现其表达水平较低，而且有表达延迟现象。这是因为AAV基因组是单链DNA的，它进入细胞以后，必须要有一个由单链变为双链的过程，然后其所携带的外源基因才能进行转录和翻译，在没有辅助病毒或其它辅助因子的情况下，这种 AAV 由单链 DNA 在细胞内复制形成双链 DNA 的过程是十分缓慢的，因此相对于其它双链DNA 病毒载体如单纯疱疹病毒（HSV）和腺病毒（Ad），其表达明显延后。此外，AAV 对细胞毒性低，培养的细胞在加入 AAV 后，细胞分裂生长能力不受太大的影响，这样也对 AAV 载体有一种稀释作用，也导致其表观表达水平较低。而在体内应用时，注射部位的组织细胞通常没有显著增殖，不会出现 AAV 载体被稀释的情况，而且在体内各种进 AAV 载体所携带外源基因表达的各种因子相对丰富，故体内应用时，AAV 载体的表达水平比较高。研究表明辅助病毒或其它辅助因子可以明显促进单链 DNA 复制成双链 DNA，从而明显提高外源基因的表达水平，故在体外应用可以考虑加入辅助病毒（Ad5）或丁酸钠（终浓度 10~50mmol/L），这样可以提高表达水平达 5~10 倍。