基因截断和定点突变

无缝克隆试剂盒设计引物进行150bp碱基的缺失的话，比如把这个目的基因分为A-B-C 3段（B是这150bp），目的基因头部引物For-A和尾部引物Rev-C仍正常设计（引物含与载体同源的序列15-20bp和目的基因序列）；基因中要缺失B的这块的引物就跨越这150bp，合成用于扩增片段A的下游引物Rev-A和用于扩增片段C的上游引物For-C，Rev-A和For-C就在A的尾部和C的头部设计同源序列引物+一定长度的各自的片段序列。

然后For-A+Rev-A扩增片段A，For-C+Rev-C扩增片段C，与线性化的载体片段一起进行无缝克隆即可。

引物设计如下图解。或者可参考小恒学术视频教程

小恒学术——SnapGene使用（二）_哔哩哔哩_bilibili

直接用snapgene进行引物设计。

进行目的基因定点突变也可以参考上面删除片段的方法，引物在突变位点处设计即可（突变位点位于引物上，通过引物引入突变）。