敲入和敲除有什么不同

做内源点突变需要 Cas9 和 donor：如果是直接合成的 donor 序列的话，同源臂的序列一般为 100bp，如果是用质粒或病毒的方式的话需要更长的同源臂，一般会合成突变位点上下1000bp 的基因，共 2000bp。
Knock in 实验的成功，除了 donor 的选择，实验之前保证 sgRNA 的特异性，验证 sgRNA的切割活性对于 Knockin 实验的成功也非常重要。