在进行gRNA时候,20 bp目标位点不是以G开头,能用G替换第一个碱基吗?
By
biothinker001
at
2023-02-10 •
0 人收藏 •
1032 人看过
在进行gRNA时候,20 bp目标位点不是以G开头,能用G替换第一个碱基吗?
1 个回复 |
最后更新于 2023-02-10
登录后方可回帖
为了使sgRNA在U6启动子下有效转录,G优选位于5′位置,其对应于20bp引导序列的第一个碱基。对于不以G开头的引导序列,建议在引导序列的5′上添加一个额外的G,产生一个21 bp的引导序列(5′-GNNNNNNNNnnNNNNNN-NNNNNNNN-3′,其中20个N对应于5′-NGGPAM上游的20 bp基因组靶序列)。添加5′G不会改变sgRNA的特异性或影响Cas9切割的效率。