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293t细胞包装病毒,包装时的10%DMEM中加入1%非必须氨基酸和丙酮酸钠,包装系统是PLVX-PURO(10 μg)、PSPAX2(7.5 μg)、PMD2G(2.5 μg)。在10cm皿中,收取48h(10ml)和72h(10ml)含病毒培养液,混合后用0.22微米的滤膜过滤,分装后保 ...
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6 天前
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从公司买的慢病毒,看了说明书慢病毒感染细胞不要超过24小时,实验室师兄说可感染72小时都没事,只要细胞状态可以,我感染了48小时后换成正常培养基,细胞状态差点,48小时荧光已经很强,但今天做WB和contral组比没有差别(3组不同的细胞系),是不是感染时间太长,影响蛋白的合成,还是病毒的问 ...
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29/08
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我构建了新城疫病毒几个结构蛋白的质粒,据文献报导将这几个质粒共转染细胞,细胞上清中会含有病毒粒子。我想收集细胞上清,通过蔗糖密度梯度离心得到病毒粒子用于WB。想问问大家我如果通过蔗糖密度梯度离心得到病毒粒子,我质粒需要转染几皿细胞(10毫升)才能满足收集到的病毒粒子跑WB?
26/08
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请教各位大牛,经常看到AAV病毒不同血清型对不同组织器官的亲和力不同,奈何查不到不同的血清型病毒是如何来的,是否因包装载体不同而进行区分呢?有文献或者链接可以参考吗?
08/07
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因实验需要,需要向乳腺癌细胞231中转染CRISPR融合蛋白质粒,如果不算慢病毒本身的骨架,就有有13000bp,加上慢病毒,可能就超过15000bp。现在很纠结要不要采用慢病毒包装,因为不知道慢病毒转染大质粒的效率。请教各位大佬
14/04
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在包AAV病毒,用的是心肌特异的启动子,质粒酶切鉴定都没问题,包出来的病毒,用lysis buffer三次冻融后取粗上清感染293发现没看到荧光。包的是GFP的质粒.是不是就算失败了。我本来想看到荧光再去纯化,要不纯化一次成本太高。但我真的不知道原因到底在哪里?转染效率挺高的,收病 ...
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2017-03-09